自体动静脉内瘘(native Arteriovenous Fistulae,AVF)是终末期肾病患者进行血液透析的常用建瘘方式,但常因血管内膜增生造成的管腔狭窄而导致失功。血管内皮细胞的功能异常是造成新生内膜增生的重要原因。防止血管内膜增生及术后再狭窄一直是亟待解决的重要课题。整联蛋白β3(Integrinβ3)是一种存在于多种细胞表面的黏附分子,可介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间的信号转导,参与调控细胞的自噬、增殖、迁移等生理过程。我们前期的工作已经发现整联蛋白β3可通过影响内皮间质化促进新生内膜增生。自噬是细胞维持稳态的一种自我更新机制,在血管损伤修复过程中发挥重要作用,但内皮细胞自噬异常会诱导内膜增生。然而目前整联蛋白β3是否通过影响内皮细胞自噬而参与内膜增生并不清楚。为了研究整联蛋白β3对自噬的影响及其调控机制,我们收集了临床AVF标本,评估其内膜增生与内皮细胞自噬之间的关系;然后利用人脐静脉内皮细胞(HUVEC),通过诱导HUVEC高表达整联蛋白β3并构建整联蛋白β3敲低细胞,在细胞水平实验研究整联蛋白β3对内皮细胞自噬的影响,并进一步对参与调控自噬的相关信号分子进行了检测;最后,我们还研究了二甲双胍对内皮细胞自噬的作用及其调节机制。结果如下:1.内膜严重增生的AVF中内皮细胞自噬相关分子呈高表达。HE染色结果显示,靠近瘘口部位静脉内膜明显增厚;免疫荧光检测结果显示,增厚的血管内膜内皮细胞LC3高表达。2.整联蛋白β3促进内皮细胞自噬。Realtime-PCR和Western Blot结果显示,TGFβ1诱导整联蛋白β3表达,细胞自噬标志分子LC3Ⅱ和Beclin-1表达也升高;整联蛋白β3敲低后,LC3Ⅱ和Beclin-1的mRNA和蛋白水平均明显下降。3.整联蛋白β3通过YAP信号调节自噬。Western Blot结果显示,整联蛋白β3表达增加或敲低情况下,Notch信号转录因子NICD、AKT、pAKT、pJNK表达变化不明显;整联蛋白β3敲低可下调细胞中Hippo信号通路中YAP(Yes-Associated Protein)YAP及其下游转录因子CTGF、LC3Ⅱ表达水平,表明整联蛋白β3可能通过抑制YAP信号阻止内皮细胞自噬;4.二甲双胍通过抑制YAP表达,促进YAP失活降低内皮细胞自噬水平。CCK-8结果表明,10、20、40mmol/L二甲双胍处理24h均可降低细胞存活率;电镜、免疫荧光及Western Blot结果表明,二甲双胍可阻止细胞中自噬体形成,降低LC3II、Belin-1、CTGF表达,促进YAP磷酸化水平。我们的研究表明整联蛋白β3可能通过促进Hippo通路中的YAP引起内皮细胞自噬,敲低或抑制整联蛋白β3的表达能够抑制细胞自噬,可能对内皮细胞起到保护作用,但还需要在动物模型上进一步验证。本研究加深了我们对调控血管内皮细胞自噬分子机制的理解,也为临床上防控血管内膜增生提供了新的靶点及实验参考。