两株滇重楼内生真菌中活性化合物的研究

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论文第一章对近年来从青霉菌中分离、提纯得到的化合物种类以及其生物活性进行了综述。第二章主要介绍了实验设计思路以及应用TLC化学多样性筛选的方法,从35株待选的云南重楼内生真菌资源中筛选出了青霉(Penicillium)MCT-21作为目标菌株。第三章主要介绍了重楼内生青霉菌(Penicillium)MCT-21菌株次生代谢产物及其生物活性研究。经过分离、提纯得到9个化合物,通过1D、2D NMR等波谱分析法鉴定其化学结构分别为:terrestrol I(1*),(E)-ascladiol(2),(Z)-ascladiol(3),gentisyl alcohol(4),3-hydroxybenzyl alcohol(5),(22E,24R)-ergosta-5α,6α-epoxide-8,22-diene-3β,7α-diol(6),5α,8α-epidioxy-ergosta-6,22-dien-3β-ol(7),7-hydroxy-4,6-dimethylphthalide(8),1,2-丁二酸(9)。其中化合物 1 为新化合物。对9个化合物进行抗菌活性实验,测试结果显示,化合物4对枯草芽孢杆菌(B.subtilis)有明显的抑菌效果,MIC值为32μg/mL;化合物1、4对金黄色葡萄球菌(S faureus)表现出明显的抑菌效果,MIC值分别为64μg/mL、64 μg/mL;化合物4对大肠杆菌(Escherichia coli)有明显抑制效果,MIC值为128μg/mL。第四章主要介绍了重楼内生青霉菌(Penicillium)MCT-21中重楼皂苷的化学筛选。用过量丙酮淹没菌丝体,得到丙酮的浸膏(YYB-1);用过量甲醇淹没丙酮提取过的菌丝体浸泡五天,用旋转蒸发仪蒸出甲醇,用稍过量的乙酸乙酯萃取剩下的水溶液四次,旋转蒸发仪浓缩蒸干,得到甲醇的浸膏(YYB-2);用与滤液相同体积的乙酸乙酯萃取滤液,静置一天,用旋转蒸发仪浓缩蒸干,重复四次,最后得到乙酸乙酯溶液的浸膏(YYB-3)。运用高效液相色谱法分析样品YYb-1,YYb-2,YYb-3中是否含有重楼皂苷。第五章主要介绍了重楼甾体皂苷诱导绿僵菌(Metarrhizium)MCT-12代谢产物的研究。对重楼内生菌株MCT-12进行诱导发酵,从中分离鉴定了 4个化合物。并进行了单体化合物抗菌活性以及协同抗菌测试研究。主要研究工作如下:对菌株MCT-12进行液体发酵,经过分离、提纯得到4个化合物,通过1D、2 D NMR等波谱分析法鉴定其化学结构分别为:4-(2-hydroxyethyl)1,3-benzenediol(1),pennogenin-3-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)[α-L-rhamnopyranosyl(1→4)-β-D-glu copyranoside(2),(4S)-4,8-dihydroxy-3,4-dihydro-1(2H)-naphtha-lenone-1-one(3),polyphyllin VI(4)。进一步研究发现,将偏诺皂苷替代重楼提取物进行诱导实验,结果同样诱导得到了红点(化合物1),这项工作给研究者在分子水平上研究内生菌与其宿主植物的相关性提供了一个思路;对4个化合物进行抗菌活性实验,测试结果表明,化合物1,2,3对除金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)以外的致病菌有一定抑制效果;化合物1、2、3混合对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus a ureus)表现出了一定的协同作用,其MIC值是256μg/mL,对其他致病菌的抗菌活性并不明显;化合物1、2混合对所有病原菌的协同抗菌活性比较微弱。
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