【摘 要】
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药物代谢相关基因SNPs的简单、快速分型对指导相关药物的个体化使用具有重要意义。本课题设计了一种等位基因特异性DNA酶自组装(Allele specific DNAzyme assembly,ASDA)比色新方法,用于SNPs简单、快速分型。该方法可直接使用口腔拭子样本,免DNA提取和纯化进行SNPs基因分型检测。本文以MTHFR C677T等位基因为模板设计了新的等位基因特异性引物,同时标记含有
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药物代谢相关基因SNPs的简单、快速分型对指导相关药物的个体化使用具有重要意义。本课题设计了一种等位基因特异性DNA酶自组装(Allele specific DNAzyme assembly,ASDA)比色新方法,用于SNPs简单、快速分型。该方法可直接使用口腔拭子样本,免DNA提取和纯化进行SNPs基因分型检测。本文以MTHFR C677T等位基因为模板设计了新的等位基因特异性引物,同时标记含有G4-DNA酶的茎环结构,从而将特异性的PCR扩增子转化为多个G4-DNA酶组装物。通过引入额外错配位点并进行优化以减少非特异性扩增。基于等位基因特异性DNA酶自主装策略,该方法能从低至200个细胞样本中直接鉴定MTHFR C677T等位基因型,显示了较高的灵敏度和优异的选择性。可在90分钟内直接检测出口腔咽拭子样本的基因型,具有良好的准确性、稳定性和实用性。本文建立的等位基因特异性DNA酶自组装比色新方法为临床实验室提供了一个实用的平台用于简单、快速SNPs基因分型,并且为发展中国家促进个体化用药的广泛应用提供潜在的检测工具。
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