手性药物研究在食品、环境、生物医药等领域都备受关注,但基于对映体水平的抗体手性识别机制研究尚不完善。氧氟沙星作是第三代喹诺酮类药物,是一种手性药物,其药物残留会对人体及环境造成危害。本课题拟在前期发现抗氧氟沙星抗体手性识别差异性现象及针对外消旋体（Rac-OFL）拮抗作用的基础上,对抗体与消旋氧氟沙星药物相互作用进行研究。因此酶切单克隆抗体得到高纯度的抗原结合片段,从抗体及片段活性、与药物相互作用及热力学等角度考察抗原抗体分子间弱相互作用,阐释手性抗体与消旋氧氟沙星的选择性识别规律,主要进行了以下几方面的工作:（1）氧氟沙星对映体抗体片段制备与鉴定本研究中分别制备了两种大小不同的抗体片段Fab和F（ab）2。分别采用木瓜蛋白酶和胃蛋白酶对氧氟沙星对映体抗体进行酶解,再运用凝胶过滤及亲和层析两步纯化法进行纯化。通过SDS-PAGE凝胶电泳鉴定所制备的两种抗体片段的纯度,并将抗体片段对应条带切下,经MALDI-TOF验证为目的抗体片段,证明抗体酶解纯化后获得了纯度较高的Fab和F（ab）2片段。为了获得抗体完整重链序列,分别提取左旋和右旋氧氟沙星对映体单克隆抗体细胞总RNA,反转录为c DNA,并在已有抗体Fab片段核酸序列基础上,设计合成上下游引物,测定获得氧氟沙星对映体单克隆抗体重链核酸序列（2）氧氟沙星对映体抗体及抗体片段的识别活性分析运用间接竞争ELISA（ic-ELISA）方法,建立左旋氧氟沙星（S-OFL）单克隆抗体、F（ab）2片段、Fab片段及右旋氧氟沙星（R-OFL）单克隆抗体、Fab片段的标准曲线,IC50分别为0.42 ng/m L、0.33 ng/m L、0.34 ng/m L、19.53 ng/m L、50.20 ng/m L。结果表明,与全抗Ig G相比,抗体片段仍具有较好的甚至高于全抗的活性。（3）氧氟沙星对映体抗体及片段与消旋氧氟沙星药物的作用方式分析对氧氟沙星对映体抗体及片段与氧氟沙星药物间相互作用进行评价。分析结果表明S-OFL单克隆抗体与外消旋体氧氟沙星具有明显的拮抗作用,但其两种抗体片段与外消旋体氧氟沙星均表现出普通的加和作用,说明S-OFL全抗和抗体片段与外消旋体药物间的相互识别有明显差异,可能是由于Fc段的缺失而导致抗体构象上发生变化。然而,右旋氧氟沙星单克隆抗体和片段在与外消旋体氧氟沙星相互作用时却无明显差异。说明一组对映体药物虽然只是构象不同,但免疫获得的抗体却存在对消旋体药物识别上的明显差别。（4）氧氟沙星对映体抗体及片段与氧氟沙星药物的热力学作用分析使用ITC研究氧氟沙星对映体抗体及片段与手性药物之间的结合热力学过程,结果表明抗体及抗体片段在结合配体药物时均具有不同的熵变和焓变。其中,S-OFL抗体及片段在与氧氟沙星相互作用时的熵变焓变规律不同,而R-OFL抗体及片段在与氧氟沙星相互作用时的熵变焓变规律相似。结合等高线结果,发现抗体与消旋药物作用时产生拮抗或协同现象的内在机制是抗体Fc部位起关键作用。（5）X-射线蛋白质结晶实验为了从微观角度阐释氧氟沙星抗原抗体识别关键位点,故进行了抗体及与药物的复合体结晶实验。采用座滴法,经过初筛和优化,制备了左旋氧氟沙星抗体F（ab）2片段和右旋氧氟沙星抗体Fab片段及其与手性药物复合物的蛋白质晶体,后续将继续进行结晶实验和数据采集。本工作在获得高纯度及高对映选择性抗体及片段基础上,对抗体及片段与药物的相互作用方式进行分析,最终认为抗体Fc部位在抗体与配体识别过程中起关键作用。