仔猪早期断奶应激诱导自噬发生规律的研究

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在现代畜牧生产中,仔猪早期断奶已经被广泛的采用,由于生产需要以及饲养条件和营养水平的不断改进,仔猪断奶的时间被不断提前,但是仔猪在断奶时易受到环境和营养等多方面的刺激,从而造成一系列的仔猪早期断奶应激综合症。自噬是一种溶酶体依赖性的降解途径,它广泛的存在于真核生物中,在细胞的生长发育以及蛋白质的代谢中发挥着非常重要的作用。我们实验室已有的研究证实在断奶后1~2天,自噬能够被迅速的激活,但是在断奶后的短时间内,自噬的变化规律还有待进一步的研究,同时由于仔猪在断奶时营养物质和能量摄入受限,随着断奶时间的延长,体内调控营养和能量代谢的通路可能也会发生变化。本试验内容包括五部分:1.在断奶过程中,仔猪血液中常规生理生化指标的变化规律;2.在断奶过程中,仔猪血液中相关激素的变化规律;3.断奶应激对仔猪肠道结构的影响;4.断奶应激对仔猪肝脏中AMPK表达量的影响;5.断奶应激对仔猪肝脏中mTOR表达量的影响。6.基于实验室已有的研究结果,探究随着断奶时间的延长,自噬的变化规律。研究结果如下:(1)通过对仔猪血液中常规生理生化指标的测定发现,与对照组相比,在断奶后1-7天,白细胞呈现下降的趋势,差异不显著;红细胞、血红蛋白浓度则是先下降后升高,差异不显著(P>0.05);红细胞平均血红蛋白浓度先下降后升高,并且在第4天显著性下降(P<0.05);红细胞体积分布宽在一定程度上是贫血的标志,在第二天显著性升高(P<0.05),随后下降。淋巴细胞绝对值、淋巴细胞百分比在一定程度上也反映了机体内的免疫状况。说明14日龄断奶会造成仔猪营养缺乏、免疫机能下降等应激。(2)通过对仔猪血液中相关激素的测定发现,与对照组相比,在断奶后1天、2天,血液中白细胞介素-6的水平分别降低了32.13%(P<0.05)、17.87%(P>0.05),然而在断奶后4天、7天分别升高了53.02%(P>0.05)、52.97%(P<0.05);皮质醇在断奶后1天,升高52.64%(P<0.05),在断奶后2天、4天、7天,分别升高31.74%,8.41%,26.09%(P>0.05);在断奶后1~7天,生长激素分别升高了7.21%,40.48%,0.5%,61.37%(P>0.05);胰岛素在断奶后1-7天,分别降低了47.99%,7.57%,37.03%,22.52%(P>0.05);胰高血糖素在断奶后1天,下降62.21%(P<0.01),然而在断奶后2-7天,胰高血糖素分别升高了22.73%,39.47%,39.41%(P>0.05)。这些结果表明,14日龄断奶对仔猪的免疫能力、能量摄入水平以及体内激素有一定的影响,但是随着断奶时间的延长,这种负面的效果会有一定的缓解。(3)通过对仔猪十二指肠的绒毛长度和隐窝深度的分析发现,14日龄断奶,在断奶后1-7天,断奶组绒毛长度与隐窝深度的比值均小于对照组,差异不显著。(4)通过检测仔猪肝脏中AMPK的表达量发现,14日龄断奶,与对照组相比,在断奶后1-2天,AMPK的活性是被显著激活(P<0.05),但是到了断奶后4-7天,AMPK的活性有所减弱,并且差异不显著(P>0.05)。同时运用糖原染色(PAS)对仔猪肝糖原进行染色,结果发现与对照组相比,断奶后1天,肝糖原少于对照组,断奶后2天,肝糖原虽然有所减少,但是与第1天相比,肝糖原还是有所增加,到了断奶后4-7天,断奶组与对照组肝糖原相差不大,对血液中葡萄糖的浓度进行分析,发现与对照组相比,断奶后1-7天,葡萄糖的浓度分别下降5%,6.67%,30.15%,9.76%(P>0.05),差异不显著(P>0.05)。(5)通过检测仔猪肝脏中mTOR的表达量发现,14日龄断奶,断奶后1~2天,mTOR的活性是显著性降低(P<0.05),但是到了断奶4-7天后,mTOR的活性有所上调,但是差异不显著(P>0.05)。(6)通过检测断奶仔猪肝脏中自噬的变化规律,结果表明,14日龄断奶,断奶后1-2天,自噬的活性显著性增强,随后呈现降低的趋势,并且最终维持在一定的水平。综合上述结果得出如下结论:仔猪早期断奶应激会影响仔猪的免疫机能、代谢机能以及对营养物质的消化吸收功能,但是这种影响效果在断奶后4-7天会有所下降。仔猪早期断奶应激会诱导自噬的发生,但是在断奶后4-7天自噬的活性减弱,最终维持在基准水平,在这个过程中,AMPK的活性随着断奶时间的延长呈现先升高后降低的趋势;而mTOR的活性随着断奶时间的延长呈现先降低后升高的趋势。
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