均相光激化学发光免疫分析技术（Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Linked Immunosorbent assay,AlphaLISA）是依靠光激化学发光的均相免疫检测技术,其中两种直径为200 nm的供体微球和受体微球通过其结合的抗原抗体共同相互作用,最终发出520-620 nm的光,在分子生物学领域得到了广泛的应用。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）属葡萄球菌属,为世界范围内最常见的食源性致病微生物,该菌株可产生一种或几种金黄色葡萄球菌肠毒素（Staphylococcal Enterotoxins,SEs）,包括SEA、SEB、SEC、SED和SEE。每年有24万例左右的金黄色葡萄球菌性食物中毒。由于金黄色葡萄球菌广泛存在于空气、污水、以及皮肤上,所以食物很容易被SEs所污染,其中含有蛋白质、淀粉、以及含水分较高的食品更加适宜金黄色葡萄球菌的生长,如各种禽类、肉类、水产类、牛奶以及奶制品。这些食品在人们的生活中是不可或缺的,由于其被认为是葡萄球菌肠毒素的重要来源,可产生大量的SED,因此SED的快速检测尤为重要。我们使用AlphaLISA方法检测SED,并与传统酶联免疫吸附测定（ELISA）方法进行了比较。首先建立了AlphaLISA检测SED体系,确定了最适AlphaLISA发光微球与生物素标记抗体的稀释比例分别为1:50和1:1000;以及ELISA包被抗体的最适浓度为3μg/m L,生物素标记抗体和链霉亲和素偶联HRP的最适比例为1:1000和1:2000;AlphaLISA对缓冲液和牛奶模拟样本SED的检出限为100 pg/m L,变异系数（Coefficient of Variance,CV）为0.3%～8.9%;ELISA对缓冲液和牛奶模拟样本SED的检出限为781.29 pg/m L,CV为1.0%～19.8%;AlphaLISA与ELISA均不与其他型肠毒素抗原产生交叉反应,但与ELISA相比,AlphaLISA检测SED的灵敏度更高,精确性更好。新型冠状病毒（SARS-CoV-2）可以通过感染下呼吸道导致新型冠状病毒肺炎（COVID-19）,简称“新冠肺炎”。SARS-CoV和MERS-CoV在全国范围内确诊病例约1万例,本次全球累计报告确诊病例供给约2467万例。因此,对SARS-CoV-2进行快速准确的检测是非常重要和迫切的。随着研究课题的深入,我们又建立了SARS-CoV-2的AlphaLISA检测体系,确定单抗1#与多抗组别作为新型冠状病毒AlphaLISA检测的最佳抗体对,AlphaLISA对新型冠状病毒N蛋白抗原的检出限为0.39 ng/m L,批内差在1.90%～8.93%之间,批间差在1.75%～9.04%之间,显示了良好的可重复性,以及对不同临床样本的检测具有较好的耐受性,与商业化ELISA试剂盒相比对灭活病毒的检测敏感性更高。我们所建立的AlphaLISA可以高效快速检测新型冠状病毒。由于AlphaLISA检测方法体系构建所需的微球购自国外公司,价格比较昂贵,限制了该方法的进一步应用。聚苯乙烯微球是将聚苯乙烯单体经过聚合反应后形成的聚合物微球。根据其制备方法的不同,聚苯乙烯微球的粒径可达几纳米至几百微米。荧光微球的制备方法包含吸附法、键合法、表面包覆法、包埋法和溶胀法。其中,溶胀法的操作较为其简单,性能稳定,且可以精准定量染色从而被广泛的应用。本课题即采用溶胀法,在聚苯乙烯微球中添加铕和含烯键化合物等,制备AlphaLISA受体微球,并对受体微球的合成方法的稳定性和重复性进行了评价,以期替代商业化微球实现AlphaLISA受体微球的国产化。采用同样的方法合成3个批次的微球,并将其与抗体进行偶联,进行抗原检测,结果显示3个批次的微球都能够获得较好的检测效果,说明该合成方法具有较好的重复性,可以用于微球的大量制备合成;也对同一批次合成微球的稳定性进行了检测,在2周内选取了3个时间点进行检测,同样能够获得较好的检测效果;之后又对合成微球检测的最优条件进行了探索,筛选出1:100稀释受体微球、1:1000稀释的生物素标记抗体构建的AlphaLISA体系为最优条件,其检测范围为50ng/m L-25pg/m L,具有较宽的检测范围和极高的敏感性。本研究所述微球的合成方法具有较好的重复性和稳定性,进行AlphaLISA检测也具有较好的敏感性,能够用于替代商业化微球,实现AlphaLISA检测原料的国产化。