纳米佐剂与免疫检查点抑制剂联合治疗肿瘤的效果研究

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探究Cp G纳米佐剂体外激活树突状细胞(dendritic cell,DC)的免疫佐剂作用,及与检查点抑制剂anti-PD-1联合应用在小鼠黑色素肿瘤模型中的抗肿瘤效果。制备包载Cp G的β-葡聚糖纳米颗粒(Cp G-encapsulated nanoparticle,CNP)并体外培养小鼠骨髓来源的树突细胞,分4组进行免疫处理,分别为PBS免疫对照组,β-葡聚糖纳米载体组(nanoparticle,NP),Cp G免疫组和CNP组,利用流式细胞仪分析DC成熟情况,ELISA分析DC培养上清中相关细胞因子表达;将体外培养的黑色素瘤B16F10细胞接种于C57BL/6N小鼠右后肢皮下,建立肿瘤模型,待肿瘤大小约为50 mm~3时,挑选肿瘤大小相对一致的60只小鼠均分为6组,其中5组为肿瘤治疗实验组,分别为PBS对照组,anti-PD-1组,NP+anti-PD-1组,Cp G+anti-PD-1组,CNP+anti-PD-1组,第六组为CNP+anti-PD-1+anti-CD8组,探究CD8~+T细胞在联合免疫治疗中的作用。后颈部皮下注射给药,共给药4次,每次间隔三天,期间隔天测量肿瘤体积,最后一次给药后第三天眼眶取血,测定血浆中IFN-γ浓度,小鼠安乐死后分离肿瘤及脾脏,使用流式细胞术方法检测瘤内浸润性T淋巴细胞比例及脾脏内T细胞比例。实验结果表明CNP佐剂能够有效刺激DC成熟,促进IL-6、IL-12、TNF-α分泌,联合anti-PD-1治疗接种肿瘤的小鼠也表现出良好的体内抗肿瘤效果,治疗后小鼠血浆中IFN-γ含量及肿瘤浸润性T淋巴细胞都有明显升高,CD8~+T细胞删除实验结果表明CD8~+T细胞在肿瘤免疫治疗中发挥重要作用。本研究构建的纳米佐剂CNP能够有效激活DC,与anti-PD-1联合使用在体内展现协同抗癌作用,显著改善肿瘤微环境,具有良好的体内抗肿瘤效果。
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