【摘 要】
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本文通过瞬时转染、荧光素双报告系统检测、RT-PCR及Realtime PCR等实验结果证实,c-Abl促进内源和外源的c-fos和p21基因的转录.我们发现c-Abl促进c-fos的基因转录依赖于c-Abl
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本文通过瞬时转染、荧光素双报告系统检测、RT-PCR及Realtime PCR等实验结果证实,c-Abl促进内源和外源的c-fos和p21基因的转录.我们发现c-Abl促进c-fos的基因转录依赖于c-Abl的酪氨酸激酶活性和核定位功能.我们利用过表达c-Abl和蛋白质免疫沉淀实验发现,在293T细胞中c-Abl和RNA聚合酶Ⅱ(RNAPⅡ)的大亚基共沉淀,并且过表达c-Abl能够增加RNAP Ⅱ大亚基的酪氨酸磷酸化程度.表达RNAP Ⅱ的大亚基CTD表达质粒,发现CTD能够抑制c-Abl促进c-fos的转录活性.染色体免疫沉淀实验结果表明,在体内c-Abl和RNAP Ⅱ能被募集到c-fos启动子的(-74-+185)区域.总之,c-Abl能够通过磷酸化RNAPⅡ促进c-fos基因转录.本文首次报道了c-Abl对RNAP Ⅱ大亚基的磷酸化能够促进c-fos基因的转录,并揭示了CTD的酪氨酸磷酸化在RNAP Ⅱ介导的基因转录中所发挥的重要作用.另外,我们利用瞬时转染293T、荧光素酶双报告检测及染色体免疫沉淀等方法研究了c-Abl是否参与了p21基因转录调控活动,发现c-Abl能够协同p53促进p21基因的转录,这种协同作用还依赖于p53的完整构象和结构,在细胞内c-Abl能够被募集到包含p53结合位点的p21启动子区域上.我们转染K562细胞,荧光素酶双报告检测结果表明,c-Abl促进p21基因的转录可以不依赖于p53,可能通过活化STAT5调控p21基因转录.本文确认了一种受c-Abl调控的下游靶基因p21,并且探讨了p53和STAT5在参与c-Abl调控p21基因转录中的重要作用,为进一步深入研究c-Abl参与基因转录调控活动的机制奠定了基础.
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