和田部分地区和田黑鸡隐孢子虫和芽囊原虫分子检测与鉴定

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隐孢子虫和芽囊原虫是常见的人兽共患肠道病原,主要引起人和动物腹泻,呈世界性分布。和田黑鸡是优良的肉蛋兼用型地方品种之一,具有抗逆抗病性强、耐粗饲、抗高温等特点,目前有关其肠道人兽共患病原感染情况的调查较少。本研究采用分子生物学方法检测和田部分地区和田黑鸡隐孢子虫和芽囊原虫感染情况,通过序列比对分析,掌握其种类/亚型分布和遗传进化特征。(1)为掌握和田黑鸡隐孢子虫感染情况和基因亚型分布特征,基于隐孢子虫SSU r RNA基因位点和gp60基因位点,采用PCR法检测和田地区18个采样点617份和田黑鸡粪便DNA样本。结果发现,和田黑鸡隐孢子虫感染率为11.5%(71/617),18个采样点中有10个检测到隐孢子虫,感染率为2.4%~46.2%,不同采样点和田黑鸡隐孢子虫感染率统计学差异极显著(P≤0.01);<30 d、30~60 d、60~90 d和>90 d的和田黑鸡隐孢子虫感染率分别为12.0%(15/125)、14.5%(48/331)、6.9%(5/72)和3.4%(3/89),感染率随鸡日龄增长呈先上升后下降的趋势,不同日龄组和田黑鸡隐孢子虫感染率统计学差异显著(P<0.05)。在SSU r RNA基因位点经序列比对分析,鉴定出2种隐孢子虫虫种,分别为贝氏隐孢子虫(n=33)和火鸡隐孢子虫(n=38)。在gp60基因位点,25份样本中鉴定出3种基因亚型,其中1个为已知人兽共患亚型IIIb A23G1R1(n=1),2个为新基因亚型:IIIb A25G1R1(n=20)和IIIb A31G1R1(n=4)。研究结果提示,和田黑鸡隐孢子虫感染比较普遍,火鸡隐孢子虫基因亚型IIIb A25G1R1和IIIb A31G1R1存在区域性遗传分布特征。(2)为掌握和田黑鸡芽囊原虫感染情况和基因亚型分布特征,基于芽囊原虫SSU r RNA基因位点,采用PCR方法检测617份和田黑鸡粪便DNA样本。发现和田黑鸡芽囊原虫感染率为26.3%(162/617),18个采样点中有16个检测到芽囊原虫,感染率为5.0%~76.3%,不同采样点和田黑鸡芽囊原虫感染率统计学差异极显著(P≤0.01);<30 d、30~60 d、60~90 d和>90 d的和田黑鸡芽囊原虫感染率分别为34.4%(43/125)、29.0%(96/331)、16.7%(12/72)和12.4%(11/89),感染率随鸡日龄增长呈下降的趋势,不同日龄组芽囊原虫感染率统计学差异极显著(P≤0.01)。经序列比对分析,鉴定出4种芽囊原虫亚型,分别为ST6(n=20)、ST7(n=137)、ST10(n=3)和ST23(n=2);种系进化分析显示,亚型ST6和ST7与我国河南鸡源芽囊原虫分离株聚类在一支,ST10亚型分别与美国牛源芽囊原虫分离株及巴西鸵鸟源分离株聚集在一支,亚型ST23与美国牛源芽囊原虫分离株聚类共同构成一个亚群结构。研究结果提示和田黑鸡芽囊原虫感染率较高,存在亚型遗传多样分布特征。综上所述,和田部分地区和田黑鸡隐孢子虫和芽囊原虫感染较为普遍,隐孢子虫以人兽共患虫种火鸡隐孢子虫为优势感染虫种,存在区域性遗传分布基因亚型;芽囊原虫呈遗传多样分布特征,以亚型ST7为优势感染亚型。研究结果为我国鸡隐孢子虫病和芽囊原虫病的流行病学调查提供了基础数据。
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