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研究背景与目的纵观全球,在人类最常见的恶性肿瘤之中,肝细胞癌赫然在列。其具有起病隐匿,进展迅猛和预后不良等特点。近些年来,随着在诊断和治疗手段上的进步,肝细胞癌的致死率较前显著降低。尽管如此,肝细胞癌依旧预后不良,主要是因为肝细胞癌的高复发率使得大部分行手术切除治疗的病例复杂化。因此,很有必要寻找出肝细胞癌潜在的发病机制,为肝细胞癌的诊断和治疗提供新的视野。本课题前期研究发现POU2F1基因在肝细胞癌中可能存在扩增,提示POU2F1与肝细胞癌的发生发展密切相关。本论文重点研究POU2F1在肝细胞癌中的临床价值以及其调控肝细胞癌的发生发展的分子机制。研究方法与结果1.通过分析The Human Protein Atlas与Oncomine数据库以及RT-PCR与Western Blot检测,发现POU2F1基因mRNA水平与蛋白水平在肝细胞癌组织中均显著上调。2.通过分析肝细胞癌临床样品数据,发现POU2F1上调与肝细胞癌的肿瘤大小、病理分级、肿瘤转移以及临床分期正相关,而且POU2F1是肝细胞癌预后的独立预测因子。3.通过Western Blot、Transwell、细胞增殖以及克隆形成等实验验证,发现沉默POU2F1抑制肝癌细胞上皮间充质转化、迁移侵袭、增殖以及克隆形成能力。反之,过表达POU2F1则促进肝癌细胞上述的恶性表型。4.前期课题组实验研究成果显示,POU2F1可能受AKT通路调控。5.通过Western Blot、Transwell、细胞增殖、克隆形成以及基因干扰等实验,证实POU2F1在AKT通路促进肝癌细胞上皮间充质转化、迁移侵袭、细胞增殖以及克隆形成中发挥关键作用。6.通过基因干扰与RT-PCR等实验,发现AKT通过促进POU2F1基因的转录从而上调POU2F1蛋白的表达。同时,转录因子POU2F1通过促进EMT基因Twist1、Snai1、Snai2以及ZEB1的转录进而诱导肝癌细胞发生上皮间充质转化。最终,我们阐明了肝细胞癌中AKT-POU2F1-Twist1/snai1/snai2/ZEB1的通路机制。研究结论1.POU2F1的mRNA扩增导致其蛋白在肝细胞癌组织中上调,且这一上调与肝细胞癌临床预后不良密切相关。2.POU2F1促进肝癌细胞上皮间充质转化、迁移侵袭、细胞增殖以及克隆形成等生物学功能。3.POU2F1在肝癌细胞中受AKT通路调控,AKT促进POU2F1的转录。4.POU2F1通过激活EMT基因Twist1、Snai1、Snai2以及ZEB1的转录从而促进肝细胞癌EMT的发生以及发展。