【摘 要】
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目的:为探讨As2O3在膀胱癌中作用机制,以及其是否通过氧化应激诱导人膀胱癌细胞损伤,并讨论其可能的分子机制,我们选取人膀胱癌5637细胞系,体外研究Cx43受As2O3影响及氧化应激对细胞的作用。研究方法:5637细胞用5%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的RPMI1640培养基,置于37?C,含5%CO2培养基中培养。细胞为上皮样贴壁生长,每2-3天传代一次。通过检测释放到细胞外的脱氢酶含量来观察
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目的:为探讨As2O3在膀胱癌中作用机制,以及其是否通过氧化应激诱导人膀胱癌细胞损伤,并讨论其可能的分子机制,我们选取人膀胱癌5637细胞系,体外研究Cx43受As2O3影响及氧化应激对细胞的作用。研究方法:5637细胞用5%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的RPMI1640培养基,置于37?C,含5%CO2培养基中培养。细胞为上皮样贴壁生长,每2-3天传代一次。通过检测释放到细胞外的脱氢酶含量来观察细胞毒性。5637细胞被接种到96孔板。刺激后,收集上清液,用相同体积的CCK-8缓冲液在室温下孵育1小时,酶标仪检测各孔OD值（检测波长450nm）。并记录结果,绘制时间曲线及计量曲线。细胞经过处理后在荧光显微镜下利用不同的荧光颜色区分活细胞和死细胞。活细胞能够通过胞内酯酶水解钙黄绿素AM,产生绿色荧光。相反,PI通过死细胞的受损细胞膜进入细胞,并与核酸相互作用,发出红色荧光。图像通过Olympus的CCD摄像机进行采集。提取蛋白质过程通过阅读文献及反复实验完成,提取出Cx43蛋白按照顺序加液至10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶上胶层,电泳、转膜,最终转移至PVDF膜。然后通过封闭过程、孵育一抗及二抗抗体,最终发光并检测蛋白,运用图像分析软件等来测定各个条带的灰度值。本实验采用β-actin作为内参蛋白来分析结果。结果:（1）As2O3诱导人膀胱癌5637细胞损伤,表现为Calcein-AM染色的活细胞数量下降,PI染色的死细胞数量增加。（2）As2O3促进人膀胱癌5637细胞表面Cx43的表达;应用Cx43抑制剂Gap26可减弱As2O3导致的5637细胞的损伤作用。（3）抗氧化剂GSH和NAC可降低As2O3引起的Cx43高表达及膀胱癌细胞损伤。结论:As2O3可通过氧化应激诱导膀胱癌细胞Cx43高表达,从而造成人膀胱癌5637细胞的损伤。
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