家蚕是一种重要的模式生物,也是研究限食对生理和寿命影响的优良材料。为探索限食寿命延长的分子机制,本文以家蚕“秋丰”为实验对象,建立了家蚕限食模型,并调查限食家蚕相关生理生化变化。在此基础上,利用q RT-PCR和RNA干扰技术,研究限制饮食对家蚕寿命相关基因在m RNA上的表达水平与寿命的相关性。1.家蚕限食模型的建立与生命体征分析以家蚕二化性限性斑纹品系秋丰为对象,从二龄幼虫起设置自由采食（AL）组与限制采食（DR）组,4-5龄期雌、雄分开饲养;AL组每日2次给予充足新鲜桑叶、全天自由采食;DR组每日1次给予AL组60%的桑叶,自由采食16 h后强制停食8 h。结果显示,限食组给食时间为自由采食组的66.6%,符合其他动物模型限食标准（60%）,DR组雌、雄幼蚕体质量分别为AL组雌、雄幼虫的67.21%和67.05%;5龄期DR组的食下量显著减少,其中雌性和雄性幼虫分别约为AL组的66.17%和63.20%。DR组雌蛾产卵数没有很明显的减少,交尾正常。统计整个龄期,雌蚕DR组比AL组延长了144 h,雄蚕DR组比AL组延长了136 h,差异均达到显著水平（p＜0.05）。2.限食后家蚕幼虫血淋巴生理生化指标分析采集DR组和AL组家蚕5龄期幼虫血淋巴,分别测定谷胱甘肽过氧化物活力、总抗氧化能力、抗超氧阴离子自由基活力以及尿酸含量的变化。结果显示,DR组血淋巴中谷胱甘肽过氧化物活力、总抗氧化能力、抗超氧阴离子自由基活力均高于AL组,体内尿酸含量亦高于AL组。表明限食可激发机体对自由基的清除,提高抗氧化能力。3.限食对家蚕寿命相关基因BmSir2、BmAmpk和BmCox表达水平的影响获取DR组和AL组5龄3 d幼虫不同组织的总RNA,利用q RT-PCR技术分析BmSir2、BmAmpk和BmCox寿命相关基因的表达水平。结果显示,限食处理对雄性幼虫BmSir2、BmAmpk和BmCox基因表达水平影响较大,在DR组中表达量均显著高于AL组。在DR组雌性中,BmSir2在马氏管表达最高,极显著高于其他组织（P＜0.01）;在其他组织中的表达水平较低。限食对雌性幼虫BmAmpk基因影响较小,在DR组雌性马氏管和表皮组织中极显著下调表达（P＜0.01）,头部和卵巢分别极显著（P＜0.01）和显著（P＜0.05）上调表达,在其他组织中均出现较小幅度的上调表达。DR组雌性中BmCox基因在马氏管、中肠和头部的表达水平极显著上调（P＜0.01）,而在表皮组织中极显著下调表达（P＜0.01）、血液中显著下调表达（P＜0.05）,在其他组织中变化不显著。4.BmSir2、BmAmpk和BmCox的RNA干涉对基因表达水平和成虫寿命的影响为了解限食对BmSir2、BmAmpk、BmCox基因表达水平与成虫寿命的影响,对蛹期10d雌性与雄性个体采用RNA干扰（RNAi）技术敲减的这3个基因,以注射ds GFP个体为对照,在羽化0 h和26 h分别提取组织总RNA,检测ds RNA的干涉效果和基因表达水平。结果显示:与ds GFP对照组相比,（1）BmSir2基因干涉后,雌性在羽化0 h该基因显著下调表达（P＜0.05）,在26 h该基因极显著下调表达（P＜0.01）;雄蛾羽化0 h该基因极显著性下调表达（P＜0.01）;（2）雌性个体在羽化0 h BmAmpk表达水平极显著性下调,26 h ds RNA对BmAmpk基因干扰作用减弱;而雄性个体在0 h和26 h BmAmpk基因均表现为极显著下调（P＜0.01）;（3）BmCox基因干涉后,雌、雄个体在羽化0 h和26 h BmCox表达水平均极显著性下调（P＜0.01）;（4）RNA干涉后成虫成活时间变短,其中BmCox基因干涉组成虫成活时间最短、变化最明显。综上所述,限食提高家蚕机体抗氧化能力,调控寿命相关基因表达,影响到家蚕寿命。该研究结果丰富了家蚕寿命调节机理,也为研究人类健康生活方式、延长寿命提供了新的思路和借鉴。