应用适配体磁珠-SERS技术建立肠出血性大肠杆菌O157:H7快速检测方法

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ZZC9919
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
食源性致病菌现场检测需要快速、高效的检测技术,而现阶段传统的显微镜检查、生化试验、微生物纯培养等检测方法耗时耗力,已经不能满足实际需求。与此相比,拉曼光谱技术可以快速扫描样品从而得到致病菌的指纹信息,通过表面增强拉曼光谱技术(Surface-enhanced Raman Scattering, SERS)大大增强生物样品的拉曼信号,且不受水的影响,使得其在微生物检测的实际应用上变得更为广阔。磁珠分离技术是利用包被特异性抗体/适配体的免疫磁珠与相对应抗原发生特异性亲和反应,从而在复杂的样品中富集和分离到目标抗原。本研究将适配体、免疫磁珠与拉曼光谱技术相结合,建立一种应用于食源性致病菌的快速检测方法。该方法具有检测时间短、操作简单、对样品无损等优势,在大体积、低浓度的样品中,能够有效分离富集靶物质,避免试验结果受到样品中复杂成分干扰,使食源性致病菌的临场检测更快速、准确。
  本研究主要为以下两个方面:
  (1)通过运用基于贵金属纳米颗粒的表面增强拉曼光谱技术,建立食源性致病菌的快速检测方法,检测包括肠出血性大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、阪崎克罗诺杆菌、肠炎沙门氏菌、单增李斯特菌在内的五种食源性致病菌拉曼图谱,验证了贵金属纳米颗粒对食源性致病菌SERS增强效果具有良好的稳定性和重复性。在SERS稳定性较好的情况下,纳米银颗粒的增强效果优于纳米金颗粒,纳米银颗粒对拉曼信号的相对峰高产生5倍增强而纳米金颗粒产生3.8倍增强。通过对照文献进行食源性致病菌特征峰归属分析,同时对五种食源性致病菌的拉曼光谱数据进行主成分分析和聚类分析,表明拉曼光谱技术可对食源性致病菌进行定性鉴定。
  (2)针对肠出血性大肠杆菌建立了一种基于磁性分离的SERS检测技术,达到特异性检测肠出血性大肠杆菌的目的。对肠出血性大肠杆菌纳米银原位还原增强拉曼复合物进行SERS检测,在500-1200cm-1范围采集SERS信号,结果表明本方法具有良好重现性,检测限可达102cfu/mL。成功在牛奶等模拟样品中特异性检测到肠出血性大肠杆菌,且与PCR检测方法进行比对,检测结果更为精准。结果表明,本方法快速、灵敏、特异性强,适用于大体积、低浓度的实际样品检测,操作简单,省时省力。
其他文献
学位
放牧是草地高效利用的方式之一,放牧家畜的消化代谢和甲烷排放是草地可持续放牧管理的基础参数,相关试验研究相对匮乏。为此,本文以滩羊为主要研究对象,在兰州大学环县草地农业试验站开展放牧试验,设置不同的放牧率、放牧季节和饲喂纤维素酶,测定家畜的消化代谢和肠道甲烷排放。主要研究结果如下:1放牧率和放牧季节对滩羊消化代谢和甲烷排放的影响。(1)对干物质采食量和消化率的影响。2018年和2019年,夏季和冬季
学位
学位
益生菌微生态制剂在人类与动物健康中的作用越来越受到重视。口服免疫途径使用特异性微生态制剂在诱发机体产生特异性黏膜免疫反应方面具有独特优势。其中以乳酸菌为代表的益生菌制剂近年来受到普遍关注,在防治多种细菌性、病毒性疾病方面展现出巨大的潜力。众所周知,此次新型冠状病毒疫情中微生态制剂被纳入治疗方案。同时益生菌在高血压的防控中也显示出非常巨大的应用前景。高血压是引起心血管疾病患者死亡的最重要的因素之一。
学位
我国是全球最大的生猪养殖和猪肉消费国家,猪的健康养殖不仅关系到生猪产业的发展,还与公共卫生密切相关。病毒性疾病是养猪业持续健康发展的重要制约因素,当前我国猪病流行呈现出“老病多变,新病时有出现”的特点。在众多猪病毒性疾病中,猪病毒性腹泻疾病的危害不容小视。猪流行性腹泻病毒是其重要的病原之一,能够引起猪的急性传染性肠道疾病,发病率和死亡率都很高,可对养猪业造成巨大的经济损失。  为了解我国规模化猪场
学位
蓝氏贾第虫(Giardia lamblia)、芽囊原虫(Blastocystis)和毕氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)是三种重要的肠道原虫,具有人畜共患性。人类和多种动物都能成为这三种肠道主要原虫的宿主,宿主感染后表现为不同程度的腹泻症状,严重者可导致死亡,对人类健康及公共卫生有着严重的负面影响。随着人们生活水平的提高和社会的进步,参观动物园成了城市生活中人们接触动物
泥鳅由于肉质鲜美,营养丰富,被大量消费者所欢迎。但是高密度养殖却增加了泥鳅暴发流行病的概率。目前,大多数养殖户选择抗生素来对抗细菌病,但是考虑到抗生素对生态系统的危害,抗生素急需被取代。乳酸菌能够改善鱼体的生长性能,提高饲料利用率,增强机体免疫力以及有一定净化水质的能力,并且乳酸菌已被证明对宿主无害。且关于乳酸菌作用于泥鳅的研究还比较少。而魏斯氏菌(Weissella confusa)属于乳酸菌的
学位
猫细小病毒病又称猫泛白细胞减少症(Feline panleukopenia, FP),是由猫细小病毒(Feline panleukopenia virus, FPV)引起的一种猫科动物的高度接触性致死性传染病。该病典型临床症状主要为白细胞严重减少和出血性肠炎。目前,该病在世界范围内流行,主要易感动物是猫,也可感染除猫以外几乎所有的猫科、鼬科、浣熊科等家养及野生动物,严重威胁了家养宠物猫及多种珍稀野
学位

维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)是一种革兰氏阴性致病菌,能够感染人,兽,鱼等水生动物。A.veronii引发的疾病具有传染性强和发病率高等特点,给水产养殖业带来较大经济损失的同时也给人类健康造成了一定的威胁。目前,A.veronii的流行性、耐药性以及致病性呈逐年增强趋势,且相关研究报道也逐渐增多,但其致病机制错综复杂尚难以阐明。因此,对A.veronii毒力因子的研究将为进一步
随着病原菌耐药性的日趋严重,新型抗生素及其类似物的研发迫在眉睫。抗菌肽因为具有独特的抗菌机制已成为最具有潜力的抗生素替代品之一,如多黏菌素B和短杆菌素,然而较短的半衰期已成为抗菌肽临床应用的主要障碍,因此延长抗菌肽的半衰期已成为新型抗菌肽的研发重点。BM16R是以抗菌肽BuforinⅡ的α螺旋部分和本实验室前期获得的MDAP-2抗菌肽α螺旋部分杂合得到的BM16为母肽,通过氨基酸替换得到的抑菌活性
学位