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食源性致病菌现场检测需要快速、高效的检测技术,而现阶段传统的显微镜检查、生化试验、微生物纯培养等检测方法耗时耗力,已经不能满足实际需求。与此相比,拉曼光谱技术可以快速扫描样品从而得到致病菌的指纹信息,通过表面增强拉曼光谱技术(Surface-enhanced Raman Scattering, SERS)大大增强生物样品的拉曼信号,且不受水的影响,使得其在微生物检测的实际应用上变得更为广阔。磁珠分离技术是利用包被特异性抗体/适配体的免疫磁珠与相对应抗原发生特异性亲和反应,从而在复杂的样品中富集和分离到目标抗原。本研究将适配体、免疫磁珠与拉曼光谱技术相结合,建立一种应用于食源性致病菌的快速检测方法。该方法具有检测时间短、操作简单、对样品无损等优势,在大体积、低浓度的样品中,能够有效分离富集靶物质,避免试验结果受到样品中复杂成分干扰,使食源性致病菌的临场检测更快速、准确。
本研究主要为以下两个方面:
(1)通过运用基于贵金属纳米颗粒的表面增强拉曼光谱技术,建立食源性致病菌的快速检测方法,检测包括肠出血性大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、阪崎克罗诺杆菌、肠炎沙门氏菌、单增李斯特菌在内的五种食源性致病菌拉曼图谱,验证了贵金属纳米颗粒对食源性致病菌SERS增强效果具有良好的稳定性和重复性。在SERS稳定性较好的情况下,纳米银颗粒的增强效果优于纳米金颗粒,纳米银颗粒对拉曼信号的相对峰高产生5倍增强而纳米金颗粒产生3.8倍增强。通过对照文献进行食源性致病菌特征峰归属分析,同时对五种食源性致病菌的拉曼光谱数据进行主成分分析和聚类分析,表明拉曼光谱技术可对食源性致病菌进行定性鉴定。
(2)针对肠出血性大肠杆菌建立了一种基于磁性分离的SERS检测技术,达到特异性检测肠出血性大肠杆菌的目的。对肠出血性大肠杆菌纳米银原位还原增强拉曼复合物进行SERS检测,在500-1200cm-1范围采集SERS信号,结果表明本方法具有良好重现性,检测限可达102cfu/mL。成功在牛奶等模拟样品中特异性检测到肠出血性大肠杆菌,且与PCR检测方法进行比对,检测结果更为精准。结果表明,本方法快速、灵敏、特异性强,适用于大体积、低浓度的实际样品检测,操作简单,省时省力。
本研究主要为以下两个方面:
(1)通过运用基于贵金属纳米颗粒的表面增强拉曼光谱技术,建立食源性致病菌的快速检测方法,检测包括肠出血性大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、阪崎克罗诺杆菌、肠炎沙门氏菌、单增李斯特菌在内的五种食源性致病菌拉曼图谱,验证了贵金属纳米颗粒对食源性致病菌SERS增强效果具有良好的稳定性和重复性。在SERS稳定性较好的情况下,纳米银颗粒的增强效果优于纳米金颗粒,纳米银颗粒对拉曼信号的相对峰高产生5倍增强而纳米金颗粒产生3.8倍增强。通过对照文献进行食源性致病菌特征峰归属分析,同时对五种食源性致病菌的拉曼光谱数据进行主成分分析和聚类分析,表明拉曼光谱技术可对食源性致病菌进行定性鉴定。
(2)针对肠出血性大肠杆菌建立了一种基于磁性分离的SERS检测技术,达到特异性检测肠出血性大肠杆菌的目的。对肠出血性大肠杆菌纳米银原位还原增强拉曼复合物进行SERS检测,在500-1200cm-1范围采集SERS信号,结果表明本方法具有良好重现性,检测限可达102cfu/mL。成功在牛奶等模拟样品中特异性检测到肠出血性大肠杆菌,且与PCR检测方法进行比对,检测结果更为精准。结果表明,本方法快速、灵敏、特异性强,适用于大体积、低浓度的实际样品检测,操作简单,省时省力。