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研究目的:基于前期补肾活血方导法治疗不孕症及再次IVF-ET失败患者的临床疗效及实验研究,为进一步探索其助孕效应,本实验通过观察补肾活血方导法对肾虚血瘀着床障碍型大鼠种植窗期子宫内膜组织形态学、子宫脏器指数、大鼠种植窗期血清孕激素(Progesterone,P)、子宫组织孕激素受体(Progesterone receptor,PR),脂氧素A4(lipoxinA4,LXA4)、LXA4受体ALX、同源框基因A10(HomeboxA10,HOXA10)、胰岛素样生长因子结合蛋白-1(Insulin-like growth factor binding protein-1,IGFBP-1)的影响初步探讨补肾活血方导法通过调控LXA4改善肾虚血瘀着床障碍型大鼠种植窗期子宫内膜容受性的作用机制,为临床用药提供理论依据。研究方法:通过阴道分泌物涂片及判定,将处于动情前期的健康成年雌性未孕SD大鼠随机分为空白组、模型组、补肾活血方低、高剂量组、中药对照组、西药对照组。除空白组外,其余各组大鼠通过给予羟基脲灌胃10天加肾上腺素皮下注射7天造成肾虚血瘀的复合模型,肉眼观察大鼠造模后的一般情况。造模同时,除空白组模型组外,其余各组大鼠给与相应药物治疗10天。造模成功后,各组大鼠通过阴道分泌物涂片筛选出处于动情期的雌鼠,按雌雄大鼠2:1的比例进行合笼,以第二日发现阴栓或阴道涂片观察到精虫者,记为妊娠第1天,妊娠后停止给药治疗,于妊娠第4日皮下注射米非司酮一次造成着床障碍模型,于妊娠第5天,用戊巴比妥钠麻醉后固定,剖腹抽取腹主动脉血液,快速取出双侧子宫,分离子宫周围脂肪组织后称重,计算子宫脏器指数,采集子宫标本,在光镜下观察各组大鼠子宫内膜组织形态学的改变,通过免疫组化技术对IGFBP-1在子宫内膜组织上进行定位,酶联免疫吸附法检测子宫组织LXA4、ICFBP-1的表达量,外周血P的含量,通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应法检测子宫组织PR、ALX、HOXA10mRNA的表达量。结果:1.补肾活血方导法对肾虚血瘀着床障碍模型大鼠种植窗期子宫内膜组织形态、子宫脏器指数的影响补肾活血方低、高剂量组子宫内膜被覆上皮有增长趋势,上皮细胞排列整齐均匀呈长柱状,腺体丰富,腺腔饱满呈圆形或椭圆形,血管丰富,间质排列均匀疏松,子宫内膜形态增长良好;补肾活血方低、高剂量组子宫湿重及子宫脏器指数均高于模型组大鼠子宫湿重及子宫脏器指数。2.补肾活血方导法对肾虚血瘀着床障碍模型大鼠种植窗期血清P含量、子宫组织PR表达的影响与空白组比,模型组大鼠种植窗期血清P含量明显降低(P<0.05),子宫组织PR水平亦明显降低(P<0.001);与模型组比较,补肾活血方高剂量组血清P含量、子宫组织PR水平均明显增高(P<0.05)。补肾活血方低剂量组子宫组织PR水平明显增高(P<0.05),血清P含量有增长趋势(P>0.05)。3.补肾活血方导法对肾虚血瘀着床障碍模型大鼠种植窗期子宫组织LXA4、ALX表达的影响与空白组相比,模型组大鼠种植窗期子宫组织LXA4、ALX水平明显升高,(P<0.001);与模型组相比,补肾活血方高剂量组种植窗期子宫组织LXA4的表达降低明显(P<0.001),子宫组织ALX的表达有降低的趋势(P>0.05)。补肾活血方低剂量组种植窗期子宫组织LXA4、ALX水平均明显降低(P<0.001)。4.补肾活血方导法对肾虚血瘀着床障碍模型大鼠种植窗期子宫组织HOXA10、IGFBP-1表达的影响与空白组相比,模型组大鼠种植窗期子宫内膜组织HOXA10水平明显降低(P<0.001),IGFBP-1的水平亦明显降低(P<0.05);与模型组相比,补肾活血方高剂量组子宫内膜组织HOXA10水平明显升高(P<0.001),IGFBP-1的表达亦明显增高(P<0.05)。结论:1.补肾活血方导法可促进肾虚血瘀着床障碍模型大鼠子宫发育,增加子宫脏器指数,改善种植窗期子宫内膜组织形态,提高大鼠子宫内膜容受性。2.补肾活血方导法助孕机制可能是:通过上调种植窗期血清P、子宫组织PR的水平,下调子宫组织LXA4、ALX的表达,促进子宫内膜组织HOXA10、IGFBP-1的增加,进而改善大鼠种植窗期子宫内膜容受性,为胚胎植入做准备。