斑点叉尾鮰病毒的增殖纯化及其结构蛋白的鉴定

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斑点叉尾鮰病毒病(channel catfish virus disease,CCVD)是危害斑点叉尾鮰养殖的主要疾病之一,给斑点叉尾鮰养殖业造成了重大损失。该病的病原斑点叉尾鮰病毒(channel catfish virus,CCV),是一种双链DNA病毒,由囊膜、间层和核衣壳组成,其基因组大小约为134 kbp,属于鱼类疱疹病毒科成员。  本实验以斑点叉尾鮰病毒(CCV)为研究对象,取得了以下的实验结果:  1.将斑点叉尾鮰病毒(CCV)感染斑点叉尾鮰卵巢细胞(channel catfish ovary,CCO)来增殖病毒,利用蔗糖密度梯度离心法对病毒粒子进行纯化,在40%和50%蔗糖梯度之间可见一条清晰、乳白色的病毒条带,负染后经透射电镜观察, CCV病毒粒子呈圆形,直径约为175-200nm,有囊膜,具有典型的疱疹病毒特征。  2.取适量纯化的CCV组分进行SDS-PAGE电泳分析,考马斯亮蓝染色后,可见约17条蛋白条带。将这些蛋白条带切下,胰酶消化后利用电喷雾四级杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF MS/MS)进行质谱分析,共鉴定了13种结构蛋白,其中包括两种膜蛋白:一种囊膜蛋白ORF59,为CCV的主要囊膜蛋白,另一种为糖蛋白ORF46;五种间层蛋白分别是:ORF74、ORF73、ORF72、ORF65和ORF15;三种核衣壳蛋白:ORF39、ORF53和ORF27,其中ORF39为CCV的主要核衣壳蛋白;两种已报道但未描述功能的蛋白,分别是ORF66和ORF79;还发现了一种从未报道过的结构蛋白ORF22。实验结果为进一步研究CCV结构蛋白的功能提供了参考。
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