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目的:本研究旨在利用生物信息学方法预测新的脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)相关基因,并研发具有抑制新生血管作用的新型多肽,验证其在体内外抑制新生血管的作用,并初步探讨其作用机制。方法:(1)基于现有的蛋白-蛋白相互作用信息,采用“最短路径”算法,筛选预测可能与CNV发病相关的基因并对其功能加以验证。(2)采用生物信息学方法从内源性蛋白——神经胰蛋白酶的Kringle结构域中筛选两段可能具有抑制新生血管作用的多肽NT/K-CRS及NT/K-CFY,通过经典的体外细胞实验和体内动物模型检测其抑制新生血管的有效性和安全性,并初步探讨其抑制视网膜新生血管的作用机制。结果:(1)利用生物信息学技术,筛选、分析、预测出了33个新的CNV相关基因。通过对这些基因进行生物学分析,证实了其中一些基因与CNV生物学进程的具有很大的相关性。(2)筛选出具有抗新生血管作用的两种多肽:NT/K-CRS(氨基酸组成CRSPDGAGRPW)及NT/K-CFY(氨基酸组成是CFYGDARGKVDWGY);通过实验(MTS增殖、细胞划痕、Transwell小室、Matrigel管腔形成实验、MTS活性及Tunel凋亡实验),说明其可有效抑制VEGF诱导的HUVECs迁移、趋化和管腔形成,具有剂量依赖性,且对正常HUVECs活性和凋亡无影响;采用鸡胚尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)新生血管模型、高氧诱导C57BL/6J小鼠视网膜新生血管(oxygen-induced retinopathy,OIR)模型,证实NT/K-CRS、NT/K-CFY多肽对可抑制CAM及视网膜新生血管且安全性高;采用Real time PCR和Western blot方法,证实NT/K-CRS/CFY多肽对可下调OIR小鼠视网膜中VEGF mRNA和蛋白表达,上调色素上皮源性因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)mRNA和蛋白表达。结论:(1)基于蛋白质相互作用(protein-protein Interaction,PPI)原理,利用“最短路径法”,可以分析、预测出与CNV相关的基因,并证实其与CNV生物学进程的相关性。(1)利用生物信息学筛选的NT/K-CRS、NT/K-CFY多肽,在体外、体内实验中均被证实具有抗新生血管作用且安全性高;且通过下调VEGF表达、上调PEDF表达的双重调控,恢复血管生长促进因子与抑制因子之间的动态平衡来发挥抑制视网膜新生血管的作用。