论文部分内容阅读
肺癌侵袭转移是肺癌的恶性标志和特征，也是导致治疗失败和患者死亡的最主要原因。肺癌转移已成为制约肺癌治愈率和生存率的主要障碍，研究肺癌转移的分子机理是该领域研究的热点。目前已知，肺癌转移是受多基因调控，转移抑制基因可能是其中最重要的一个基因。nm23基因是第一个被发现的肿瘤转移抑制基因，目前已从DNA，mRNA和蛋白水平均证实了nm23H1基因的低表达，等位基因缺失与肺癌的高恶性，高转移率等均有密切关系，并发现伴有nm23-H1基因低表达和等位基因缺失的肺癌常常有其它转移相关基因表达异常。nm23被认为在多基因调控的“肺癌转移抑制级联”中起到重要作用。为了探讨nm23-H1对肺癌细胞骨架结构，骨架相关生物学行为的影响，以及nm23-H1基因对其调控的分子机理，本研究从DNA，mRNA和蛋白三个水平筛选鉴定出nm23-H1基因缺失的人肺癌高转移细胞株L9981，并构建了带有增强绿色荧光蛋白和野生型nm23-H1基因的逆转录病毒真核表达载体PLXSN-nm23-H1-EGFP，且成功转染到L9981细胞，观察人肺癌细胞株L9981转染nm23-H1基因前后肺癌细胞骨架结构、骨架相关生物学行为及其相关基因表达变化。本研究观察到: 1.应用Southen Blot，RT-PCR，Westen blot PCR-SSCP和DNASequenCe技术从9株人肺癌细胞株中鉴定筛选出缺失nm23-H1基因的人高转移肺癌细胞株L9981。该细胞株具有母系细胞的恶性转移表型。 2.应用质粒DNA的转化，酶切，连接技术成功构建了逆转录病毒真核表达载体pLXSN一nm23一Hl一EGFP，将质粒pLXSN一nm23一HI一EGFP转染L9981细胞株后，nm23一Hl一EGFP融合蛋白能够在受染细胞内持续，稳定和高效表达。 3.nm23一Hl基因转染可使L9981细胞株细胞折光性降低，伪足减少，并降低细胞粘附能力。 4.nm23一Hl基因转染可明显降低L9981肺癌细胞株的体外侵袭能力及运动迁移能力。 5.nm23一Hl基因转染可明显减少人肺癌细胞株L9981微丝的聚集，增加微管蛋白的聚合。 6.nm23一Hl基因转染人肺癌细胞株L9981后，可显著下调整和素Qv，Q一actin基因的表达水平，但对p一tubulin的表达无明显影响。 结论:(1)人高转移肺癌细胞株L9981中存在nm23一Hl等位基因的杂合性缺失。(2)nm23一H1基因可明显降低L9981肺癌细胞株的体外侵袭能力和运动迁移能力，减少细胞微丝聚集，增加微管蛋白聚合。(3)nm23一Hl基因调控人L9981肺癌细胞株细胞骨架的分子机理可能是下调整合素av和a一aetin的表达水平。