论文部分内容阅读
目的:本研究从百余种中草药化学成分及其衍生物中筛选出体外高活性抗炎化合物,并在硫酸葡聚糖钠（Dextran Sulfate Sodium,DSS）诱导的小鼠结肠炎动物模型上验证筛选出的化合物的抗炎活性,探讨其抗炎机制。研究结果有助于拓宽涉及自身免疫性疾病相关抗炎药物的应用,并为炎症性疾病的药物研究与治疗提供了新思路。方法:1. 利用荧光报告基因小鼠Th细胞分化及药物筛选方法对111个天然来源化合物及药用植物提取物进行初步筛选,从中筛选出5个具有明显活性的小分子化合物,进行更深一步的浓度依赖筛选,通过流式细胞仪上机检测,以分析CD4+细胞中GFP+的比率。2.选择DSS诱导的小鼠结肠炎为适合的动物模型,选取中药成分巨大戟醇衍生物D9(分子式C25H36O5;分子量M=416。由课题组提供)为待测样品,按随机方法将动物分为正常对照组、DSS模型组、D9高剂量组（剂量为10 mg/kg）和D9低剂量组（剂量为5 mg/kg）,腹腔注射给药。从一般情况及体重变化、疾病活动度指数、结肠长度及组织学变化等方面研究D9对DSS诱导的小鼠结肠炎的作用影响和防治效果。3.通过取材小鼠血清和结肠组织,运用Elisa和PCR方法检测D9对DSS诱导的小鼠结肠炎中Th1、Th2和Th17细胞相关指标的影响,研究D9的免疫作用机制。结果:1. 在报告基因小鼠T细胞体外培养分化模型上,化合物YY1（巨大戟醇-3-O-当归酸酯）及其化学结构类似物D9、D11(C27H40O5;M=444)、D13(C32H40O5;M=514)、Ⅱ-（2）对IL-17和IFN-γ的表达有明显的抑制作用,对IL-4的表达有明显的促进作用。在此基础上,对YY1及其衍生物D9、D11、D13、Ⅱ-（2）进行了进一步浓度依赖筛选评价,确认活性最强的是YY1,其他的活性接近,略弱于YY1,呈现一定的剂量依赖关系。但前期动物预实验显示YY1有较大的毒性,而YY1的结构类似物D9的安全性较好,因而选用D9作为下一步的实验药物。2. 通过在DSS诱导的小鼠结肠炎动物模型上的验证,D9高剂量组（10 mg/kg）对DSS诱导的小鼠结肠炎有一定的缓解治愈效果,在防止小鼠体重过速下降,修复结肠粘膜损伤,降低疾病活动度指数（The Disease Activity Index,DAI）评分和结肠组织病理评分等方面具有较好的疗效,减缓了疾病的严重程度发挥了抗炎修复的重要作用。3. 通过对与DSS诱导的小鼠结肠炎相关的细胞因子和基因的检测,D9高剂量组（10mg/kg）抑制Th17细胞转录因子RORγt及IL23/Th17细胞通路相关细胞因子IL-17、IL-23R和IL-22的表达,同时下调IFN-γ、上调IL-4以保持Th1/Th2平衡。结论:1.巨大戟醇-3-O-当归酸酯及其结构类似物,20-去氧巨大戟醇衍生物D9、D11、D13和Ⅱ-（2）体外筛选试验中展现出较高的活性,与炎症因子关系密切,它们可能具有较好的抗炎功效,具有开发潜能,可实验于炎症相关疾病药物的开发研究。2.D9对DSS诱导的小鼠结肠炎有一定的缓解治愈效果,其作用可能是通过对效应T细胞有关的细胞因子的调节,平衡异常的Th1/Th2漂移,抑制Th17细胞分化进而抑制IL-17分泌,从而起到调节炎症和保护肠粘膜的作用。