【摘 要】
：
【目的】本研究旨在通过构建体内外慢性阿霉素（DOX）心肌损伤模型,探讨miR-146a在DOX诱导的慢性心肌损伤中的作用及机制,以及循环miR-146a水平与DOX心肌损伤之间的关系。【方法】第一部分:使用浓度梯度（0-5μM）和时间梯度（0-72h）的DOX刺激人心室肌细胞系（AC16s）,CCK-8法检测细胞的活力;Western Blot检测下游凋亡、自噬相关蛋白表达变化;TUNEL、流式细
【基金项目】
：
国家自然科学基金项目（81670293）；
论文部分内容阅读
【目的】本研究旨在通过构建体内外慢性阿霉素（DOX）心肌损伤模型,探讨miR-146a在DOX诱导的慢性心肌损伤中的作用及机制,以及循环miR-146a水平与DOX心肌损伤之间的关系。【方法】第一部分:使用浓度梯度（0-5μM）和时间梯度（0-72h）的DOX刺激人心室肌细胞系（AC16s）,CCK-8法检测细胞的活力;Western Blot检测下游凋亡、自噬相关蛋白表达变化;TUNEL、流式细胞术检测细胞凋亡水平;GFP-LC3检测细胞自噬流变化;AC16s分别转染miR-146a的模拟物（mimics）和抑制剂（inhibitors）后用DOX（0.5μM,48h）刺激,以探究miR-146a在DOX所致慢性心肌损伤中对凋亡和自噬的调控作用;最后,在Targetscan生物信息学网站上预测miR-146a的下游靶基因TAF9b,用RT-PCR及双荧光素酶报告基因法验证其靶向性,构建TAF9b si RNA,与miR-146a inhibitors共转染于AC16s后用DOX（0.5μM,48h）刺激,通过补救实验验证靶基因在DOX所致慢性心肌损伤中的作用。第二部分:6周龄雄性C57BL/6小鼠和miR-146a基因敲除小鼠,用DOX（5mg/kg/w,4w,i.p.）建立慢性DOX心肌损伤模型,RT-PCR检测不同时间点心肌组织中miR-146a的表达;超声心动图检测小鼠心脏收缩功能;HE染色检测心肌组织结构变化;TUNEL检测心肌细胞凋亡水平;透射电镜检测心肌细胞超显微结构及自噬水平;Western Blot检测靶基因及下游凋亡、自噬相关蛋白表达改变。第三部分:6周龄雄性C57BL/6小鼠,用DOX（5mg/kg/w,4w,i.p.）建立慢性DOX心肌损伤模型,RT-PCR检测不同时间点血清中miR-146a的表达;收集DOX化疗病人及非DOX化疗病人化疗前后的血清标本及临床资料,RTPCR检测血清中miR-146a的含量并分析其与临床指标BNP,肌钙蛋白之间的关系。【结果】第一部分:CCK-8结果显示DOX呈时间和浓度依赖性降低AC16s细胞活力,并在DOX（0.5μM,48h）时细胞活力下降至50%左右;TUNEL、流式细胞术及Western Blot结果显示DOX促进AC16心肌细胞凋亡,表现为细胞凋亡率升高,Bax、Cleaved caspase-3表达上调和Bcl-2表达下调;GFP-LC3和Western Blot结果显示DOX抑制AC16心肌细胞自噬,表现为LC3荧光强度降低,LC3B-Ⅱ/Ⅰ及Beclin-1下调;RT-PCR结果显示,miR-146a在DOX干预后先上调,随后降低直至低于对照组水平;在DOX刺激下,过表达miR-146a能抑制AC16心肌细胞的凋亡,并促进其自噬,而敲除miR-146a进一步加剧心肌细胞的凋亡,并抑制其自噬;Targetscan生物信息学预测及双荧光素酶报告基因显示miR-146a靶向作用于TAF9b,并通过TAF9b/p53途径发挥其在DOX所致慢性心肌损伤中的保护作用。第二部分:RT-PCR结果显示,在DOX小鼠慢性心肌损伤模型的心肌组织中,miR-146a在3-7天升高,随后下降直至低于对照组水平;超声心动图结果显示,DOX干预后,与野生型小鼠相比,miR-146a敲除小鼠心脏收缩功能明显降低;HE染色结果显示DOX干预后,miR-146a敲除小鼠心肌纤维排列较野生型小鼠更加紊乱;TUNEL染色提示DOX干预后,miR-146a敲除小鼠的原位心肌细胞凋亡水平较野生型小鼠更高;透射电镜显示DOX干预后,miR-146a敲除小鼠的较野生型小鼠心肌细胞线粒体肿胀更加明显,自噬水平显著降低。第三部分:RT-PCR结果显示,在慢性DOX小鼠心肌损伤模型的血清中,miR-146a在3-7天升高,随后下降直至低于正常水平;在化疗病人血清中,DOX化疗后循环miR-146a水平在急性期升高,并与血清BNP水平呈正相关。【结论】miR-146a通过靶向TAF9b,调节P53的表达,抑制DOX引起的心肌细胞凋亡和自噬紊乱,从而保护DOX所致慢性心肌损伤;此外,循环miR-146a水平可能是DOX所致心肌损伤的标志物。
其他文献
动脉粥样硬化是一类严重威胁人类生命健康的心血管疾病。在动脉粥样硬化的发生位置,脂肪的堆积对血管内皮造成损伤,内皮细胞过表达黏附分子,单核细胞被招募到内皮细胞表面,并逐渐迁移进入内膜下,引发炎症反应。同时,动脉粥样硬化发生部位微环境中的细胞形态,血流方式等均发生改变,所产生的的复杂机械信号通过内皮细胞转化成生物信号,反过来对细胞的生长、形态、功能等都造成重要的影响。因此,研究外界机械信号对血管内皮细
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）是PI3K家族中的一种丝氨酸/苏氨酸激酶,对蛋白质和脂质生物合成,细胞周期进程,细胞的增殖,存活和衰老都有着重要的调节作用。而肺是人体中暴露于环境中的最大器官,其在执行呼吸功能之外,还具有一定的免疫调节功能,能够抵抗外来病原体的侵袭。不过如果外界的刺激过于频繁,那么肺很有可能会处于持续的炎症状态之中,这会
目的使用贴附式可充电长时程动态心电图记录仪Smartpacth,进行心房颤动（AF）消融术后心电监测,定期长时程随访,探究该类患者心律失常的发生规律及AF术后复发情况及复发因素的分析。方法选取2018年7月至2018年12月到普陀区中心医院首次行AF消融手术的52例患者,在术后第1、6、12、26周分别按期佩戴使用Smartpacth进行7天的心律监测。结果52例患者中共检测出29例（55.8%）
目的:本实验旨在研究平滑肌细胞表型转化对心肌细胞缝隙连接的影响。方法:1.提取大鼠原代肺静脉血管平滑肌细胞（SMC）,TGF-β1（1ng/ml,干预24小时）诱导平滑肌细胞表型转化,RT-q PCR法检测collagen I、vimentin、calponin、micro RNA 27b的表达;2.分别建立Transwell直接接触式及非接触式共培养体系,将HL-1小鼠心肌细胞分别与收缩型或分泌
肺动脉高压是一种难治性疾病,预后较差。近年来,肺动脉高压的治疗药物发展突飞猛进,靶向治疗药物广泛应用于肺动脉高压患者中,显著改善了患者的预后。然而,自20世纪80年代以来,对于肺动脉高压患者是否采用抗凝治疗仍有争议,并且随着抗凝药物的发展,对肺动脉高压抗凝药物的选择也是一大难题。迄今为止,尚无任何随机对照研究和高质量的队列研究证实抗凝治疗的疗效,也很少有系统性研究有关的抗凝药与肺动脉高压靶向药物之
研究背景和目的:急性肺损伤（acute lung injury,ALI）及其严重阶段急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）是临床常见的呼吸系统危重症,死亡率高达40%,至今仍缺乏有效的药物治疗。研究显示,巨噬细胞极化在ALI/ARDS的发生、发展及转归过程中发挥重要作用,调控巨噬细胞极化有望成为治疗ALI/ARDS的新方向。近期,课题
背景急性心肌梗死是目前人类猝死的主要病因之一。虽然目前对于心梗的诊疗技术进步,但对于心梗后发生的心肌纤维化尚未明确治疗方法。心肌纤维化导致心肌顺应性下降进而导致心功能障碍,并发展为心力衰竭。因此,研究心梗后心肌纤维化的机制,研发新的治疗靶点对于提高患者生活质量与降低死亡率具有重要意义。心梗后心肌纤维化最主要的病理过程是心脏成纤维细胞分化为肌成纤维细胞并大量分泌细胞外基质。心脏成纤维细胞激活并分化为
目的本研究检测分析了 P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）在原发免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia,ITP）中的表达水平及与ITP的激素耐药（glucocorticoid-resistance）现象之间的相关性,探究了肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-ind
目前,国内学术界对建材行业物流服务质量的研究相对较少,更缺乏一套科学的、合理的评价指标体系。结合国内有关大型施工企业的现状以及当前建材市场的交易情形,通过问卷调查获得了247位建材行业工程采购管理人员的相关数据。分析结果发现,影响建材物流服务质量的主要因素为:建材商家诚信、突发状况处理措施、产品信息更新及时性以及退换货手续的方便性。此外,建材行业物流服务质量不仅对顾客忠诚具有直接影响,还通过顾客满
背景静脉高压,是慢性静脉疾病病理生理改变的重要因素。持续的静脉高压环境可激活血管内皮,导致慢性炎症,最终导致溃疡的形成,影响患者的生活质量和社会经济。近年来,在血管内皮细胞表面发现了一层糖萼,它对内皮细胞的功能有密切的影响。舒洛地特,是一种高度纯化的糖胺聚糖混合物,能有效抑制白细胞的活化和与内皮细胞的粘附。因此,通过建立一个合适的下肢静脉高压大鼠的动物模型,观察下肢静脉高压,对大鼠后肢静脉内皮糖萼