论文部分内容阅读
[背景] 鼠疫作为一种烈性传染病，至今人们对其的致病因素、发病机制还不能够完全了解。尽管现在已经有很多种鼠疫疫苗，但是这些疫苗对肺型鼠疫的免疫保护作用并不是很理想。基于F1和V抗原的基础上，加入其他的具有免疫保护作用成分的多亚单位疫苗将是未来鼠疫疫苗研究的一个方向。对自然环境下感染的患者和EV76疫苗攻击的人群体内血清抗体谱进行研究将为更好的了解鼠疫的致病机制，寻找新的亚单位疫苗成分提供线索。蛋白芯片技术是近年来发展起来的能够同时研究多个抗原—抗体、蛋白—蛋白相互作用的高通量技术，它具有大规模、高通量、敏感性高、所需样本少等特点。
[方法] 挑选出149个鼠疫菌已知的或者推测的与毒力相关蛋白的基因与表达载体PET32a连接在大肠杆菌BL21（DE3）中表达，利用表达的目的蛋白氨基酸端带有6×His标签与Ni—NTA具有亲和的原理，通过96孔板对蛋白进行高通量纯化。纯化的蛋白点在醛基化玻片上制备蛋白芯片。通过与鼠疫患者血清、EV76疫苗株免疫人群的血清反应，检测不同血清中抗体升高的种类和趋势。
[结果] 本实验中共有116个蛋白表现为有意义。通过分析鼠疫患者和EV76疫苗株免疫人群的血清抗体谱，共有57个蛋白在所有的血清中检测到相应的抗体。鼠疫患者中一部分来自于云南省家鼠疫源地的腺型鼠疫，一部分来自于野鼠疫源地的肺型鼠疫。其中只在腺型鼠疫患者体内YPCD1.41，YPMT1.50Ac，YPO2100，YPO2117，YPO2135，YPO2315，YPO2321，YPO2944，YPO3015，YPO3616，YPO3754，YPPCP1.08c，12个蛋白可以产生相应的抗体。而肺型鼠疫所特有的共10个蛋白可以产生相应的抗体即 YPCD1.38c，YCD1.37c，YPO1860，rv10，YPMT1.05c，YMT1.46c，YPMT1.74，YPMT1023，YPO2134，YPO3516.其中在自然感染的人群中共有8个蛋白始终存在，并且这些蛋白所产生的抗体升高幅度大，所以可以作为下一阶段鼠疫疫苗研究的重点，研究其保护性。除此之外，还有部分特异性抗体升高的蛋白，这些蛋白可能与鼠疫菌在体内的致病性相关。分析不同感染状态下的抗体谱，将为更深入了解鼠疫菌的致病机制提供线索。