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白花龙胆为大宗常用藏药,具有“解毒、利咽”的功效,是三味龙胆花丸等经典藏成药的重要原料。该药来源复杂,其主流品种有大花龙胆Gentiana szecheyii Kanitz、高山龙胆 G.algida Pall.、岷县龙胆 G.purdomii Marq.。其中大花龙胆为一级濒危藏药,资源可持续利用前景不容乐观,且化学成分与高山龙胆、岷县龙胆有明显的区别,缺失龙胆苦苷、獐牙菜苷等环烯醚萜类代表成分,药效物质基础不明;高山龙胆、岷县龙胆植物形态相似,品种间存在过渡类型,分类混乱。针对上述问题,本文应用ISSR分子标记技术及基于ITS2序列探索高山龙胆与岷县龙胆的亲缘关系并检测大花龙胆的遗传多样性,同时采用急性咽炎动物模型对大花龙胆进行不同极性部位的药效学研究。实验结果如下:(1)利用12条ISSR引物对高山龙胆2个居群、岷县龙胆3个居群,共72份样品进行PCR扩增,共得到161个扩增位点,多态位点百分率达92.54%。Nei基因多样性指数H在0.1818～0.1976之间,Shannon信息指数I在0.2634～0.2847之间。遗传分化系数Gst为0.4193,基因流Nm为0.6926,表明高山龙胆、岷县龙胆居群间遗传变异多,遗传多样性丰富,居群间基因交流匮乏,造成居群间遗传分化大。(2)高山龙胆与岷县龙胆的ISSR聚类图显示,当遗传相似系数为63%时,五个居群分为三类,其中居群GSW与居群GSY聚为一类,居群MXB与居群MXH聚为一类,居群MXR单独聚为一类。而居群MXR与居群MXH、GSW的遗传距离相同,并且居群GSW与居群MXH的种间遗传距离比高山龙胆种内居群GSW、GSY的遗传距离小,居群MXR与居群GSW的种间遗传距离比岷县龙胆种内居群MXR、MXB的遗传距离小。鉴于此,说明基于“株高、花朵数目、花梗长短”无法将高山龙胆与峨县龙胆明确区分开。若依据《中国高等植物》中“花冠斑点的有无”对高山龙胆与岷县龙胆进行定种,则ISSR聚类结果显示,部分高山龙胆与岷县龙胆聚在一起,同样无法将高山龙胆与岷县龙胆区分开。(3)高山龙胆与岷县龙胆的ITS2序列同源比对结果显示,五个居群72个个体的ITS2序列主要分为两种类型,而每类中均包含高山龙胆与岷县龙胆不同居群中的个体,遗传距离在0.0000～0.9984之间。基于ITS2序列及ISSR分析结果,建议高山龙胆与岷县龙胆两品种合并。(4)利用ISSR分子标记对大花龙胆进行遗传多样性分析。12条ISSR引物对大花龙胆四个居群60份个体进行扩增,多态位点百分率为89.80%,Ne 基因多样性指数H在0.1364～0.2070之间,Shannon信息指数I在0.2140～0.3168之间,遗传分化指数Gst为0.3434,基因流Nm为0.9560。与其他一些濒危植物相比,大花龙胆具有丰富的遗传多样性,遗传多样性主要来源于居群内的变异。说明大花龙胆处于濒危状态的压力不是遗传多样性缺乏造成的,多半来源于人为因素造成的环境压力及自身的生物学特性影响。(5)大花龙胆ITS2序列同源比对结果显示,大花龙胆所有个体的ITS2序列表现为高度一致性,不同居群内的ITS2序列较为稳定,不受环境、地理分布等影响。(6)将白花龙胆主流品种的ITS2序列与从GenBank数据库中调取的白花龙胆易混品种的ITS2序列一起,通过MEGA6.06构建系统发育树。结果显示,系统发育树与传统经典分类中的品种亲缘关系呈现一致性,除高山龙胆、岷县龙胆、高冷龙胆三者无法区分外,通过ITS2序列能将其他品种区分开,ITS2序列可作为大花龙胆的DNA条形码,用于大花龙胆及其混伪品的鉴别。(7)采用25%氨水化学刺激致大鼠急性咽炎模型,观察大花龙胆不同极性部位对模型大鼠组织病理形态学及血清IL-10、TNF-α表达的影响。结果显示,大花龙胆总浸膏、乙酸乙酯、正丁醇部位可快速修复大鼠咽喉部病变组织,与模型对照组相比,具有统计学差异(P<0.05);大花龙胆总浸膏及正丁醇部位可明显减低大鼠血清中IL-10、TNF-α的水平,与模型对照组相比,具有显著的统计学差异(P<0.01)。综合评价大花龙胆不同极性部位对大鼠咽喉部及炎症因子的影响,本研究认为大花龙胆总浸膏及正丁醇部位治疗急性咽炎效果显著。