细胞死亡与生命的发生、发展、衰老和疾病密切相关。细胞凋亡是一种比较温和的死亡方式,但是细胞坏死的发生就比较剧烈。早年有研究认为细胞坏死是不受调控的,但随着对细胞坏死的不断深入研究,细胞坏死被证明是受调控的。细胞死亡发生时,若阻断caspase-8的活性,RIPK1和RIPK3就不会被Caspase-8切割。RIPK1与RIPK3通过RHIM结构域结合,使RIPK3磷酸化磷酸化的RIPK3会招募MLKL,使MLKL磷酸化激活,磷酸化的MLKL寡聚化,并转移到细胞膜上形成空洞,导致细胞坏死发生。RIPK3是细胞坏死的重要蛋白,但其功能的调节机制还不清楚。为了对细胞死亡进行更加深入的研究,我们从ZBP1的结合蛋白质谱分析中发现了 TRAF4蛋白。通过构建了 TRAF4敲除的MEF细胞,研究发现TRAF4敲除的MEF中RIPK3的表达水平比野生型MEF中显著升高,但是一些其他死亡相关蛋白RIPK1和MLKL的表达与野生型细胞没有明显差异。在TNF-α,Smac mimetic和caspase inhibitor z-VAD-fmk刺激下,TRAF4-/-MEF更早更剧烈地发生细胞坏死。我们推测TRAF4对RIPK3功能有调控作用,认为TRAF4通过降解RIPK3抑制细胞坏死发生。研究发现TRAF4与ZBP1,RIPK1和RIPK3结合,并且ZBP1和RIPK3结合在TRAF4的C-TRAF结构域。进一步实验发现,TRAF4是RIPK3的泛素化修饰E3连接酶,TRAF4利用它的RING结构域泛素化降解RIPK3蛋白。通过PI染色和Western blot检测MLKL的活化,发现TRAF4通过降解RIPK3抑制RIPK3和MLKL的寡聚化和MLKL向细胞膜的转运。这些结果说明TRAF4通过降解RIPK3蛋白抑制细胞坏死。我们还探究了 TRAF4对于转录因子NF-κB激活的影响。我们发现TRAF4对于内源NF-κB激活基本没有影响。我们的发现对于我们更加深入地研究细胞坏死调控机制有所帮助。目前治疗癌症的化疗、放疗方法主要是通过细胞凋亡的原理杀伤癌细胞。但是许多癌症对于化疗,放疗产生耐药性。因此,未来对于癌症治疗的新思路将采用诱导细胞坏死。我们的研究也为研发癌症治疗药物提供一些有异的思路。