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猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）引起的一种高度接触性传染病,以母猪繁殖障碍、仔猪和育肥猪呼吸道症状及高死亡率为主要特征,在世界范围内广泛传播,给养猪业造成了极大的经济损失。猪感染PRRSV后机体中细胞因子,如IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α等显著升高,引起“炎症风暴”,造成免疫系统以及肺脏、肾脏、心脏等器官损伤,从而引起感染猪死亡。本文将先从体外实验探究鬼针草提取物抗PRRSV炎症的作用模式并筛选主要活性物质,通过非靶向代谢组学筛选异奥卡宁抗PRRSV炎症的关键代谢物,并将鬼针草提取物运用于感染PRRSV的断奶仔猪观察其抗病毒的作用及其对免疫性能的影响。1.鬼针草提取物体外抗PRRSV及其机制的研究采用水煮醇沉的方法制备鬼针草提取物,通过观察细胞病变和CCK8法检测预防模式、杀毒模式和治疗模式下鬼针草提取物对PRRSV感染Marc-145细胞活性的影响。进一步采用实时荧光定量PCR法,检测鬼针草提取物以及主要活性物质槲皮素、金丝桃苷、奥卡宁和异奥卡宁对PRRSV诱导Marc-145细胞炎症的影响。结果表明,预防模式和直接杀毒模式没有显著效果（P＞0.05）,治疗模式下600和800μg/m L鬼针草提取物均能改善PRRSV引起的Marc-145细胞病变,增加细胞活力（P＜0.05）。实时荧光定量PCR结果表明,鬼针草提取物100、200、400、600、800μg/m L均能改善PRRSV诱导Marc-145细胞炎症因子IL-6和TNF-α的影响（P＜0.05）;鬼针草提取物主要活性成分中槲皮素50、100μg/m L,奥卡宁25、50、75μg/m L,异奥卡宁12.5、25、50、75μg/m L均能改善PRRSV诱导Marc-145细胞炎症因子IL-6和TNF-α的影响（P＜0.001）。因异奥卡宁的效果优于鬼针草提取物及其它活性成分,后续实验选用异奥卡宁进行研究。Western blotting结果表明异奥卡宁能抑制PRRSV诱导的Marc-145细胞的IκB、NF-κB的磷酸化进而抑制IκB、NF-κB炎症通路,从而减少炎症反应。2.基于代谢组学技术探究异奥卡宁抑制炎症机制采用LC-MS/MS技术非靶向代谢组学技术检测异奥卡宁对PRRSV诱导Marc-145细胞炎症的作用,并筛选关键的代谢通路,采用统计学分析,建立包括主成分分析、偏最小二乘判别分析和正交偏最小二乘判别分析在内的多维统计分析模型,并结合单维统计分析筛选出差异代谢物,综合实验数据可知:从空白组和模型组,模型组和模型给药组综合分析,发现与炎症相关的代谢产物有12个,分别为无水四环素、D-景天庚酮糖-7-磷酸钡盐、水合氯醛、D-果糖、马来酰胺酸、胞嘧啶、尿嘧啶、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、5’-单磷酸鸟苷、吡哆醇、鸟嘌呤核苷、圣草酚。代谢通路富集分析发现异奥卡宁改善PRRSV诱导炎症作用的主要途径为烟酸和烟酰胺代谢途径。3.鬼针草提取物对感染PRRSV断奶仔猪免疫功能的影响21日龄断奶仔猪接种PRRSV,3日后分别饲喂添加0.4%、0.8%、1.2%三个浓度鬼针草提取物的基础日粮,每隔7天空腹采血,观察给药28 d期间的断奶仔猪的生长状态和免疫功能,分离血清检测总Ig G及细胞因子,实时荧光定量PCR检测血清中PRRSV载量,第28 d采集肺膈叶组织做病理切片。结果表明,鬼针草提取物提高血清中Ig G的含量,并且通过调节细胞因子来降低血清中PRRSV载量;肺膈叶的病理组织学显示病毒组仔猪的肺脏呈现典型的间质性支气管肺炎,肺泡壁中成纤维细胞增生以及有大量的炎性细胞浸润,肺中可见散在大小不一的出血灶;给药组的病理组织学变化相对于病毒组有所改善。综上所述:鬼针草提取物在治疗模式下可以通过降低NF-κB的激活,抑制PRRSV诱导产生的炎症因子,从而抑制炎症反应,进而降低PRRSV对仔猪的损伤,本研究为鬼针草作为抗PRRSV药物的开发提供理论基础。