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研究背景肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC;本论文中简称为肝癌)高居我国恶性肿瘤年死亡率的第二位,对我国人民的生命健康构成严重威胁。肝癌的治疗策略是基于手术切除的综合治疗,分子靶向治疗是肝癌综合治疗中重要组成部分,而开发新的靶向治疗药物的关键在于找到合适的治疗靶点。以往的研究已显示,STC2在肝癌组织中的表达升高,可能与肝癌的进展密切相关。但截止目前为止,STC2在肝癌增殖凋亡调控方面的作用机制尚不十分清楚,仍需进一步研究阐明。研究目的探索STC2基因对肝癌细胞增殖凋亡的影响,并且初步分析其在肝癌细胞增殖凋亡调控中的分子作用机制,为肝癌靶向治疗提供潜在的靶点及理论依据。研究方法1.采用实时荧光定量PCR测定STC2基因在肝癌细胞系中的表达水平,并采用慢病毒介导的siRNA技术构建STC2敲减组和对照组SMMC-7721肝癌细胞系。2.应用MTT生长曲线、PI-FACS细胞周期测定法、克隆形成实验和Annexin V-APC单染法检测两组细胞增殖凋亡的差异。3.采用PCR Array技术检测92个增殖凋亡相关基因在两组细胞中的表达水平差异,并且应用荧光实时定量PCR法验证差异表达基因。研究结果1.STC2基因在多种肝癌细胞系表达水平明显高于正常肝细胞系。STC2敲减组和对照组肝癌细胞的慢病毒感染效率均超过80%,且两组细胞生长良好,STC2敲减组细胞中STC2基因的表达水平明显低于对照组(P=0.0035)。2.MTT生长曲线结果发现STC2敲减组肝癌细胞的生长速率明显低于对照组,STC2敲减后的STC2敲减组处于G0-G1期的细胞比例稍增多(P=0.028),而S期的细胞比例稍减少(P=0.040),而G2-M期未见明显差异(P=0.055)。STC2敲减组SMMC-7721肝癌细胞集落形成数目明显低于对照组(P<0.01)。STC2敲减组肝癌细胞的凋亡水平为(17.11±0.35)%,而对照组肝癌细胞的凋亡水平为(6.39±0.35)%,即STC2敲减组肝癌细胞的凋亡水平明显升高并达到了对照组的2.67倍(P<0.01)。3.PCR Array的结果发现STC2敲减组与对照组肝癌细胞中有30个增殖凋亡相关基因存在差异表达,其中,8个基因的表达差异倍数超过2倍。qRT-PCR验证则显示这8个基因中只有3个基因在SMMC-7721肝癌细胞系中的表达差异与PCR Array结果一致且差异倍数超过1.5倍,分别是APC、APAF1和PTEN,提示这3个基因可能是STC2调控肝癌SMMC-7721细胞增殖凋亡的下游作用基因。结论1.STC2基因在肝癌细胞系中表达上调,且STC2基因敲减可抑制肝癌细胞生长增殖并促进其凋亡,提示STC2可能是肝癌治疗的潜在靶点。2.STC2可能通过抑制APAF1、PTEN、APC等下游作用基因的表达而发挥其促进肝癌细胞生长、增殖并抑制其凋亡的作用。