不同培养条件海洋微生物胞外多糖的结构与免疫活性研究

来源 :中国海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:BBQChris
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本文从2株海洋微生物在6种不同培养基中的发酵液中提取得到12种胞外粗多糖,在对其进行基本理化性质分析基础上,进一步对其免疫活性进行了研究。主要研究结果如下:1.在12种胞外粗多糖中,AF3、AF2、SEK1及SEK3多糖得率较高,分别为10.1%,9.7%,8.0%及7.9%。运用高效液相色谱法(HPLC)、红外光谱(IR)、高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)等方法对所有胞外粗多糖的单糖组成、官能团性质及分子量等进行了分析比较。结果表明12种胞外粗多糖均不含糖醛酸;AF4,AF6,SEK4均不含硫酸根,其余样品含有少量硫酸根。AF4,AF6及SEK4中主要是Glc,分别为85.5%,80.4%和87.0%;AF1,AF3,SEK5及SEK6的中主要为Man和Glc,分别占总单糖比例的72.5%,80.7%,81.9%和81.3%;AF2、SEK1、SEK2、SEK3中主要是Man,分别达66.5%、67.5%、52.9%、73.5%。2.以含Man含量高且多糖得率高的AF3为对象,通过732#阳离子交换柱层析、Capto Q阴离子交换柱层析及Sepharyl S100凝胶柱层析对其进行分离纯化,得到多糖组分AF3-A1及AF3-A2,其中AF3-A1相对分子量32kDa,总糖含量85.9%,不含蛋白以及硫酸根、糖醛酸等酸性基团,单糖种类主要含有Man(>95%),属于中性甘露聚糖。通过甲基化GC/MS、NMR、MS等方法对纯化后多糖组分AF3-A1结构进行解析,表明,AF3-A1是以(1→6)--D-Manp为主链,C-2位存在一定分支结构,是由聚合度从2-5不等的β-D-Manp和(1→2)--D-Manp的甘露聚糖组成。3.粗多糖AF3经Capto Q阴离子交换柱分离纯化0.6M盐洗得到的组分AF3-A2的相对分子量82kDa,总糖含量79%,蛋白含量15%,不含硫酸根、糖醛酸等酸性基团;单糖中以甘露糖与半乳糖的摩尔比为8.3:1.7,是主要含甘露糖的杂多糖,属于半乳甘露聚糖肽。同样通过甲基化GC/MS、NMR、MS等方法对AF3-A2多糖结构进行解析。结果表明AF3-A2是以-D-(1→6)-Manp为主链,C-2位存在一定的分支结构,其支链中的一部分是由聚合度从2-5不等的-D-(1→2)Manp、-D-(1→2)-Manp--D-(1→3)-Manp及β-D-Galf(1→组成。4.对12种不同培养条件海洋微生物胞外多糖、2种纯化多糖及2种甘露寡糖混合物体外对小鼠免疫调节作用进行研究。结果表明,微生物多糖体外对正常小鼠脾淋巴细胞、胸腺淋巴细胞增殖能力普遍高于甘露聚糖肽注射液的增殖能力,且在一定范围内呈剂量依赖趋势;粗多糖体外对正常小鼠脾淋巴细胞、胸腺淋巴细胞增殖作用普遍高于纯化后多糖及甘露聚寡糖混合物;样品与阳性对照品ConA及LPS发生协同作用,共同促进正常小鼠免疫细胞代谢活力;粗多糖AF3及SEK1体外对正常小鼠胸腺细胞具有促进作用,可以显著增强正常小鼠胸腺细胞代谢活力。另外在这16种胞外多糖及寡糖混合物体外抗H1N1活性实验中,粗多糖体外抗甲型流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)抑制率高于纯化后多糖及甘露聚寡糖混合物,其中AF3的抑制率最高,为69.6%,初步证明AF3是一种良好的免疫调节剂。本论文获得了2种结构新颖的甘露聚糖,其良好的免疫调节和抗H1NI病毒活性,为其深入研究并开发为免疫调节药物奠定了基础。
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