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灰霉（Botrytis cinerea）是一种死体营养型葡萄孢属植物病原真菌，寄主广泛，可侵染200多种植物。该病原菌可导致灰霉病的产生，给中国果蔬产业造成了极大的经济损失。灰霉NADPH氧化酶(Nox)是一种位于细胞质膜上的蛋白酶复合物，其调节亚基(NoxR)在灰霉活性氧的合成和病原菌致病力的调控过程中起着重要作用，因此进一步研究NoxR的互作蛋白有助于深入了解灰霉的致病机制。本研究主要运用灰霉原生质体转化、表面等离子共振(SPR)、蛋白质免疫共沉淀(CoIP)等技术，寻找可能与NoxR互作的蛋白并分析，为揭示NADPH氧化酶调控灰霉致病力的作用机制提供依据。 1、构建了标签多肽FLAG/HA与NoxR蛋白的融合表达载体，并通过灰霉原生质体转化到NoxR敲除突变株中，获得的灰霉菌株△NoxR∶NoxR-FLAG/HA的生长速率基本恢复到野生型水平，但是经过Western Blot未能检测到融合蛋白NoxR-FLAG/HA与相应抗体的杂交条带。 2、构建了GFP标签与NoxR蛋白的融合表达载体，并通过灰霉原生质体转化到NoxR敲除突变株中，获得的灰霉菌株△NoxR∶NoxR-GFP/GFP-NoxR的生长速率和致病力均基本恢复到野生型水平;荧光显微镜下观察发现此菌株GFP能成功表达。 3、利用表面等离子共振技术(SPR)得到与Anti-GFP抗体结合的NoxR-GFP/GFP-NoxR蛋白复合物。对其结合的动态曲线和蛋白量进行了分析。 4、利用蛋白质免疫共沉淀结合质谱技术(CoIP/MS)鉴定到146个可能与NoxR互作的蛋白。对这些蛋白的生物学功能进行了分析和整理。 本研究通过筛选NoxR互作蛋白的方式探究了NADPH氧化酶对灰霉菌活性氧和致病力的调节机制，为揭示活性氧在植物-病原菌互作过程中的作用及其机制提供了理论依据。