松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)是寄生于松属植物的一种线虫,它能引起松树萎蔫病,导致大量的木材损失,在国内被列为重要的检疫对象。目前,该病在日本、中国、美国、加拿大、韩国等国家都有分布,因危害严重,难于防治从而受到世界各国的重视。其中,中国和日本受害最严重。它不仅给林业生产带来巨大损失,而且造成生态景观的破坏。因此,对松材线虫致病机理的研究具有重要的理论和实践意义。 很多学者对松材线虫病的病因及其致病机理进行了研究,然而松材线虫引起松树萎蔫病的致病机理目前还不明确,伴随科学工作者对植物寄生线虫的深入研究,发现线虫的食道腺分泌物在其取食过程中起着重要的作用,所以松材线虫食道腺分泌物对寄主细胞及其新陈代谢影响的分子机制日益受到研究者的关注。长期以来,由于松材线虫个体微小,且易和真菌的菌丝以及细菌等杂质混在一起,从而影响试验的准确性,因此得到纯净的线虫材料对实验研究至关重要。由于松材线虫和拟松材线虫食道腺很小,其分泌物的量更是甚微,因此如何提取足量的食道腺分泌物成为实验研究的关键。因此,本研究工作主要对松材线虫和拟松材线虫(Bursaphelenchus mucronatus)的分离方法进行了改进,并用药物刺激方法分析食道腺分泌颗粒蛋白含量的变化,进而提取食道腺分泌物进行电泳分析。主要研究结果如下: 1.线虫分离方法的改进:用裂褶菌培养繁殖松材线虫后,当用浅盘法收集时,线虫的悬浮液中含有大量类似线虫形状的菌丝以及大量的细菌,从而使以需要纯净松材线虫为材料的研究无法进行。本文通过用90目/平方毫米的筛子自制的线虫分离器进行初级分离,然后在同一离心力下(1,700g,10min)以不同浓度的蔗糖溶液为离心介质进行二次分离试验,得出30%(w/w)的蔗糖溶液效果最好,能够把松材线虫和断裂菌丝分离。本文还分别以硫柳汞、硫酸庆大霉素、青霉素、链霉素、K-Medium的无菌去离子水这五种药物溶液进行线虫消毒灭菌,同时以空气刺激法来观察这些药物是否影响线虫的活性,结果是:K-Medium的