解毒维康片抑制HL-60白血病细胞增殖的实验研究

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目的研究解毒维康片(JDWKP)对白血病细胞HL-60增殖、凋亡及分化的影响,并观察其对凋亡相关因子Bcl-2和c-myc基因mRNA表达水平及血管内皮生长因子的影响,探讨解毒维康片抗白血病的作用机制,为其在临床应用治疗急性白血病提供理论依据。方法首先采用血清药理学的实验方法,从大鼠中制备解毒维康片的含药血清,采用MTT检测方法,观察JDWKP对HL-60细胞增殖的影响;采用DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术(FCM)、逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)半定量测定Bcl-2、c-myc mRNA表达水平等,观察JDWKP对HL-60细胞凋亡及其凋亡相关因子的影响;采用NBT还原试验及肿瘤细胞体外集落培养试验,观察JDWKP对HL-60细胞分化的影响;采用酶联免疫吸附法(ELASA),观察JDWKP对HL-60细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。结果①解毒维康片可明显抑制HL-60细胞的增殖并呈时间-剂量效应。②琼脂糖凝胶电泳显示,JDWKP可诱导HL-60细胞出现明显的凋亡“梯状”条带,下调凋亡相关因子Bcl-2,c-myc mRNA表达水平。③NBT还原试验及体外集落培养试验显示,低、中剂量JDWKP可诱导HL-60细胞分化,并且随着细胞分化,集落形成能力下降。④JDWKP可降低HL-60细胞培养上清液中VEGF表达水平。结论解毒维康片含药血清可抑制HL-60细胞的增殖、诱导其凋亡,并促进其分化,这可能与其能够下调凋亡相关因子Bcl-2、c-myc mRNA表达水平、诱导细胞分化以及抑制血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平相关。
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