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利用放射性核素标记反义探针进行反义治疗是将阻止癌基因表达的反义技术与放射性核素内照射作用有机结合,以提高肿瘤治疗效果的一种方法。目的:探讨利用脂质体转染反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide ,ASON),正义寡核苷酸(sense oligonucleotide,SON),125I标记的CerbB-2反义肽核酸(antisense peptide nucleic acid,asPNA)等阻断人卵巢癌细胞株SKOV3中CerbB-2基因的表达,观察其对细胞增殖的影响。方法:1.合成CerbB-2- asPNA并用125I标记CerbB-2- asPNA。2.根据处理SKOV3细胞药物的不同,分以下3个实验组(1)对照组:①SKOV3细胞对照组、②脂质体(liposome,L)对照组、③顺铂(diamminedichloroplatinum ,DDP)对照组;(2)寡核苷酸及反义肽核酸组:①SON、②ASON、③asPNA、④L-SON、⑤L-ASON;(3)125I标记反义肽核酸组:①Na125I、②125I-asPNA、③125I-L-asPNA。3.运用RT-PCR检测各组细胞CerbB-2的mRNA表达。4.运用流式细胞仪检测各组细胞的Her-2蛋白表达率和凋亡率。5.用MTT法观察各组药物对细胞增殖的影响。结果: 1.125 I标记CerbB-2-asPNA的标记率为(56.900±4.384) %,放射化学纯度为(87.000±0.990) %,放射性浓度为3.7 MBq(0.1μCi)/mL,化学浓度为5.00μmol/L。2.RT-PCR检测结果表明SKOV3细胞对照组CerbB-2-mRNA的灰度比为(1.451±0.019),125I-L-CerbB-2-asPNA、SON、ASON、L-SON、L-ASON、DDP作用细胞48h后,CerbB-2-mRNA的灰度比为(0.687±0.099)、(1.039±0.071)、(1.079±0.061)、(0.984±0.039)、(0.970±0.178)、(0.979±0.162),与SKOV3细胞对照组比较差异有统计学意义(P=0.004、0.009、0.04、0.003、0.045、0.042)。3.流式细胞仪检测Her-2蛋白表达结果表明SKOV3细胞对照组的Her-2蛋白表达率为(98.725±0.630) %, 125I-L-CerbB-2-asPNA作用细胞24h后,Her-2蛋白表达率为(46.195±0.332) %,两者间差异有统计学意义(P=0.001),当其用量为10μl和20μl时,Her-2蛋白表达率分别为(98.075±0.654) %、(46.195±0.332) %,组间差异有统计学意义(P=0.001)。SON、ASON、asPNA、L-SON、L-ASON作用细胞24h后,Her-2蛋白表达率为(79.215±0.320) %、(60.963±0.863) %、(75.230±0.529) %、(83.940±0.349) %、(54.740±0.531) %与SKOV3细胞对照组比较差异有统计学意义(P=0.001、0.001、0.001、0.027、0.001)。4.流式细胞仪检测结果显示SKOV3细胞对照组的凋亡率为(0.313±0.103) %,125I-L- CerbB-2-asPNA作用24h后,细胞的凋亡率为(0.663±0.093) %,两者差异有统计学意义(P=0.043)。5.MTT法检测结果表明SKOV3细胞对照组培养第3天测得吸光度OD值为(0.187±0.052),125I-L- CerbB-2-asPNA、DDP、L-SON、L-ASON作用细胞24h后,第3天测得吸光度OD值分别为(0.102±0.033)、(0.026±0.006)、(0.090±0.012)、(0.082±0.027),与SKOV3细胞对照组两两对比,差异有统计学意义(P=0.012、0.001、0.001、0.001)。结论:1. 125I-L-CerbB-2-asPNA、SON、ASON、L-SON、L-ASON、DDP对人卵巢癌细胞株SKOV3 CerbB-2的基因表达在mRNA水平上有抑制作用,与DDP组对比差异无统计学意义。2. 125I -L-CerbB-2-asPNA、SON、ASON、asPNA、L-SON、L-ASON对人卵巢癌细胞株SKOV3 CerbB-2基因的蛋白表达有抑制作用。3. 125I -L-CerbB-2-asPNA促进人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡。4. 125I -L-CerbB-2-asPNA、L-SON、L-ASON对人卵巢癌细胞株SKOV3有抑制效应。