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目的:通过体内实验,阐明木棉花水提物在便秘动物模型中的作用。在分子水平上探讨对便秘动物作用的机制,明确其作用与Cajal间质细胞(Interstitial Cell of Cajal,ICC)、水通道蛋白(aquaporin,AQP)及相关胃肠调节肽之间的关系,并寻求作用靶点,为预防和治疗便秘提供新的思路和方法。方法:1.建立便秘模型:应用治疗腹泻的药物盐酸洛哌丁胺每天给小鼠灌胃,灌胃一小时后,记录并计算每只动物排便粒数及重量,粪便含水量及首粒排黑便时间,来反映模型小鼠的排便情况。只有当模型组粪便含水量显著低于对照组,或者是首粒排黑便时间显著高于对照组,则证明便秘模型造模成功。2.选取60只小鼠,按照每组10只小鼠随机分组,共分成6组,包括对照组、模型组、阳性组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。适应2天后开始给药,共给药8天。对照组每天予生理盐水灌胃两次;模型组、阳性组、低剂量组、中剂量组和高剂量组每天均先予盐酸洛哌丁胺灌胃,1h后模型组予生理盐水灌胃,阳性组、低剂量组、中剂量组、高剂量组予酚酞混悬液或相对应浓度的木棉花水提物灌胃。第7天进行粪便含水量的测定。第8天进行首粒排黑便时间的测定,晚上让所有小鼠禁食过夜。第9天除了对照组之外的所有小鼠予盐酸洛哌丁胺灌胃,半小时后,对照组和模型组用墨汁灌胃,阳性组、低剂量组、中剂量组和高剂量组予含有相应药物的墨汁灌胃。观察6组小鼠的一般情况,并进行小肠推进率的测定。3.采用苏木素-伊红染色法(hemabxyin-eosin stain,HE)观察小鼠肠组织的病理形态学变化。4.采用免疫组化法检测c-kit蛋白以了解ICC的变化,检测水通道蛋白AQP3、AQP8的表达。5.通过酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠血清里相关胃肠调节肽中胃动素(Motilin,MTL)、胃泌素(Gastrin,Gas)、P物质(Substances P,SP)、血管活性肽(Vasoacive Itestina Peptide,VIP)、内皮素(Endothelin,ET)和生长抑素(Somatostatin,SS)的含量。结果:1.粪便含水量测定结果显示:与对照组比较,模型组明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性组、低剂量组、中剂量组和高剂量组粪便含水量明显升高(P<0.05),阳性组及高剂量组能使粪便含水量回归至正常水平。首粒排黑便时间测定结果显示:与对照组比较,模型组首粒排黑便时间明显延长,且有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,中剂量组、高剂量组首粒排便时间明显缩短,且有统计学意义(P<0.05)。小肠推进率测定结果显示:与对照组比较,模型组小肠推进率明显降低(P<0.05);与模型组比较,低剂量组、中剂量组及高剂量组小肠推进率均有升高,其中仅高剂量组的升高有统计学意义(P<0.05)。2.HE染色结果显示:对照组、阳性组和高剂量组粘膜层上皮细胞完整、排列整齐、规则,杯状细胞形态正常,数目无减少;肌层、外膜无异常。模型组粘膜层上皮细胞破损、缺失,杯状细胞减少,固有层结肠腺杯状细胞缺失,肌层、外膜未见异常;低剂量组偶见粘膜层上皮细胞破损、缺失,偶见固有层结肠腺杯状细胞缺失,肌层、外膜未见异常;中剂量组偶见粘膜层上皮细胞破损、缺失,肌层、外膜未见异常。3.c-kit平均光密度值实验结果显示:与对照组比较,模型组c-kit平均光密度值明显降低(P<0.05);与模型组比较,高剂量组c-kit平均光密度值明显升高(P<0.05)。AQP3、AQP8平均光密度实验结果可见:与对照组比较,模型组AQP3、AQP8平均光密度明显升高(P<0.05),高剂量组AQP3与其无统计学差异;与模型组比较,阳性组、低剂量组、中剂量组和高剂量组AQP3平均光密度明显降低(P<0.05);高剂量组AQP8平均光密度明显降低(P<0.05)。4.小鼠血清中相关胃肠调节肽实验结果显示:与对照组比较,模型组的MTL、Gas和SP含量显著降低(P<0.05)。跟模型组相比,阳性组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的MTL含量明显升高(P<0.05);中剂量组、高剂量组的Gas含量明显升高(P<0.05);中剂量组、高剂量组的SP含量明显升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组的VIP、SS含量有升高趋势,但无统计学意义(P>0.05);然而模型组的ET含量却低于正常组,但无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,低剂量组、中剂量组、高剂量组的VIP含量有所降低,但无统计学意义(P>0.05);中剂量组ET含量明显降低(P<0.05);阳性组、低剂量组、高剂量组SS含量明显降低(P<0.05)。结论:木棉花水提物对便秘有缓解作用,其对便秘小鼠的粪便含水量、首粒排黑便时间、小肠推进率都有影响,且与剂量有一定的正相关性。以上作用的机制可能与上调便秘小鼠的c-kit蛋白表达,降低AQP3、AQP8的表达,提高MTL、Gas和SP的分泌,降低部分VIP、ET和SP的分泌有关。