氧化胁迫环境诱发内皮功能失调,并导致一系列心脑血管疾病的发生,内皮细胞氧化损伤过程中磷脂代谢的变化规律研究,对解释该过程机制具有重要意义。本文以外源性过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞系EA.hy926为模型,运用高通量的脂质组学研究策略,结合信号转导,研究这一过程中川芎嗪(TMP)和丁烯苯酞(BP)的作用机制。在本研究中,基于LC/ESI/MSn的脂质组学手段,建立了EA.hy926细胞的磷脂图谱,获得了8类(PG、PE、PC、PI、PS、PA、LPC和LPE)共200多种磷脂分子的准确定性定量信息。结合多元统计分析,发现氧化损伤进程中,具有长链、多不饱和烃链的磷脂及醚基磷脂被氧化降解最多,同时伴有PLA2酶的激活和溶血性磷脂LPC、LPE的产生。细胞磷脂随时间延长大量降解及溶血性磷脂生成,造成细胞膜性质改变是细胞损伤的根本原因。研究表明,加入TMP预处理,可显著增加氧化损伤细胞PC含量,具有抗氧化和抑制PLA2酶,减少溶血磷脂产生的作用,且对增加具长链、多不饱和的磷脂和醚基磷脂有偏好;BP预处理除此之外,还可一定程度增加PI含量,表明其对PI-PLC酶的抑制作用。TMP和BP的抗磷脂氧化特性和改变相关磷脂酶活性的功能,使其具有卓越的细胞保护特性。由于PLA2酶在以上研究中显示出其重要的研究价值,因此加入其相关信号转导MAPK途径和COX、LOX途径的抑制剂PD98059和ETYA。通过多元统计分析发现ETYA和TMP预处理细胞在磷脂代谢模式上有一定相似之处,而ETYA对醚基磷脂有更强的偏好,但对其他易氧化磷脂无明显选择性,意味着其抗氧化作用弱于TMP;PD98059和BP预处理细胞预处理细胞具有类似代谢模式,均可抑制PI-PLC酶活力,但PD98059促进长链PS合成,可导致细胞凋亡性死亡,对细胞无保护作用。进一步通过加入分子荧光探针证实了氧化胁迫过程中PLA2酶的作用和溶血性磷脂的产生,通过蛋白免疫印迹实验证明急性氧化损伤过程中cPLA2活性增强是通过磷酸化途径,且与ERK磷酸化之间的互为调控,并据此初步构建了ERK途径和脂质信号途径之间的转导模型。