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本实验主要采用超高效液相色谱—串联质谱(UPLC/MS/MS)联用的方法,检测经多次注射人绒毛膜促性腺激素(h CG,300IU/kg?周)和鲤鱼脑垂体匀浆液(carp pituitary extract,CPE,20mg/kg?周)促熟的鳗鲡(Anguilla japonica)雄鱼血液和性腺中7种类固醇激素的含量变化,并观察其脑垂体中Gt H细胞超微结构变化;还研究了6种波长(380,450,530,600,680和780nm)下,鳗鲡精子密度(D)与吸光值(A)之间的关系,旨建立一种快速检测雄鳗精子密度的方法。实验分为3组:对照组,成熟组和排精后10d组。研究发现对照组雄鱼精囊解剖时精巢薄且少,呈肉红色,精小叶很小呈半圆形。精巢内主要都是精原细胞,精原细胞大小不一,平均直径10μm,小室内存在中空结构,精巢内结缔组织较多,精巢处于第Ⅰ期:精原细胞前增殖期。成熟组雄鳗胸鳍变黑,胸围变大,腹部柔软,轻轻挤压鱼腹部有乳白色精液流出。解剖后发现性腺大且肥厚,精小叶呈乳白色,小叶间有白色精液。精巢中大部分为精子,有少量的次级精母细胞;精巢生精囊壁变薄,精巢中的结缔组织明显减少,中空消失;精子的活力和体积都很大,呈涡旋状运动,部分精子游离至生精囊外,精巢处于第Ⅴ期:精子完全成熟期;排精10d组雄鳗身上开始出现黑色斑点,腹部不饱满,挤压腹部很少有精液流出,偶尔会有少量黄色液体流出。精巢内几乎全部为精子,但生囊内精子数量少;从组织学分,精巢处于第Ⅵ期:精子完全成熟期。鳗鲡雄鱼脑垂体Gt H细胞呈梨型,长径约为9μm,短径约为5μm;细胞核大,近似椭圆型,核直径为4-5μm;内质网、高尔基体、线粒体均清晰可见;细胞中还有较多的电子密度不同的分泌小球(体积较大)和分泌颗粒(体积较小)。对照组雄鳗Gt H细胞中有大量的分泌颗粒,分泌小球较少,没有空泡,线粒体不多,内质网和高尔基体也不明显,表明细胞的代谢活动微弱。成熟的鳗鲡雄鱼脑垂体Gt H细胞中分泌小球增多,部分外排形成空泡。细胞中线粒体数量非常多,内质网多且明显,表明细胞代谢活动旺盛。排精10d后的鳗鲡雄鱼脑垂体Gt H细胞中内分泌小球融合成圆形或块状,细胞内出现大量大小不等的空泡,线粒体减少,内质网不明显,表明细胞代谢减弱。超高效液相色谱—串联质谱(UPLC/MS/MS)检测结果显示,鳗鲡血液和精巢中睾酮(testosterone,T)、17α,20β-二羟基-4-孕烯-3-酮(17α,20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one,DHP)和17α-羟孕酮(17α-OHP)3种激素含量较高,其含量变化:对照组血液和性腺中T、DHP、17α-OHP的含量分别为0、2.9±0.5、0ng/m L,0.21±0.30、0、2.32±1.65ng/g;排精组中含量分别为0.74±0.23、6.75±2.21、15.6±2.97ng/m L,0.9±0.22、8.24±2.47、17.91±2.53ng/g;排精10d后组中含量分别为0、7.87±0.6、5.39±0.66ng/m L,0.87±0.03、0、7.41±0.41ng/g。孕酮(P)、雌酮(E1)、β-雌二醇(17β-E2)、雌三醇(estriol,E3)四种激素含量特别少,几乎检测不到;结果表明,T、DHP、17α-OHP三种激素在对照组鱼体内含量最低,排精时达到峰值,排精10天后含量减少。透射电镜观察发现排精组鳗鲡脑垂体Gt H细胞中分泌小球增多,部分外排形成空泡。细胞中线粒体数量非常多,内质网多且明显,细胞代谢活动旺盛。对照组和排精10d组鳗鲡的Gt H细胞胞代谢相对较弱。实验研究了6种波长(380,450,530,600,680和780nm)下,鳗鲡精子密度(D)与吸光值(A)之间的关系。结果发现,在6种不同波长下,以鳗鲡精子密度1×107个/m L作为检测下限,吸光值随着精子密度的增加而增大;根据精子密度与吸光值拟合回归方程,发现二次回归方程拟合度较好,其中680nm为最适检测波长,其回归方程为A680=-0.0007D2+0.2579D-0.3165(r=0.9928)。结果表明,采用分光光度法能快速测定鳗鲡精子密度,对精子计数程序的标准化有一定的作用。总之,本文研究了性类固醇激素在鳗鲡发育不同时期的含量与变化,发现部分性类固醇激素是随着发育阶段的进行其含量的显著升高,影响其含量变化和转化的关键因子需要进行深入研究。