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翻译控制肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP)是一种高度保守的蛋白,广泛存在于动物、植物及酵母中。动物TCTP功能的研究较为系统深入,而植物TCTP功能的研究相对较少。目前已从紫花苜蓿、拟南芥、水稻、大豆、小麦、黄瓜等植物中克隆了 TCTP基因。研究发现,植物TCTP具有调节细胞生殖生长、抗细胞凋亡、抗热激、耐低温、耐高盐、抗干旱、抗氧化等功能。巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)是一种重要的热带经济作物,是天然橡胶的主要来源。研究发现,橡胶树中含有两个TCTP基因(HbTCTP和HbTCTP1)。HbTCTP1已被详细研究和报道,而对HbTCTP的研究较少,仅有基因克隆和基本表达模式分析。本研究克隆了HbTCTP启动子、系统分析HbTCTP在橡胶树不同组织、叶片不同发育时期、死皮和健康橡胶树,激素/胁迫处理下的表达模式,分析了 HbTCTP亚细胞定位,鉴定HbTCTP的互作蛋白及其在抗氧化中作用。同时,构建了 HbTCTP过表达载体,获得了阳性转基因烟草植株,具体研究结果如下:1、获得长度为1201 bp的HbTCTP启动子序列,该序列除具有启动子核心序列TATA-box和增强子元件CAAT-box等典型的真核生物启动子基本元件外,还含有大量与激素响应、生物及非生物胁迫应答相关的顺式作用元件,如乙烯响应元件(ERELEE4 和 LECPLEACS2)、脱落酸(ABA)响应元件(EBOXBNNAPA,MYB1AT,MYB2AT,MYB2CONSENSUSAT,SEF4MOTIFGM7S,WBBOXPCWRKY1,MYCCO-ONSENSUSAT),赤霉素(GA)响应元件(GARE1OSREP1,GAREAT,PYRIMIDIN-EEBOXHVEPB1,PYRIMIDINEBOXOSRAMY1A,MYBGAHV)、水杨酸(SA)响应元件(WBOXATNPR1)、伤害应答元件(WBOXNTERF3)、铜应答元件(CURECORE-CR)、热激应答元件(CCAATBOX1)及盐诱导元件(GT1GMSCAM4)等。2、组织表达模式分析表明,HbTCTP在胶乳中表达量最高,而在其它组织中表达量相近且较低;HbTCTP在叶片不同发育时期表达存在差异,在淡绿期表达量最高,古铜期表达量最低;干旱、低温、高盐及过氧化氢胁迫处理下,HbTCTP表达持续下调;乙烯和茉莉酸处理下HbTCTP表达存在波动,但整体呈下调趋势;伤害处理后,HbTCP表达呈先下降后上升模式,最低和最高点分别出现在24 h和48 h。此外,HbTCTP在死皮橡胶树中表达量高于健康树。以上结果说明HbTCTP表达无组织特异性,在叶片不同发育时期表达存在变化;HbTCTP表达受激素和逆境胁迫处理调控,与橡胶树死皮相关。3、构建了 HbTCTP-YFP融合蛋白表达载体,并将其转化水稻原生质体进行瞬时表达,通过激光共聚焦对HbTCTP进行亚细胞定位观察,结果表明HbTCTP定位在细胞膜、细胞质和细胞核中。4、鉴定到四种蛋白与HbTCTP互作,序列分析表明这四种蛋白分别是橡胶延长因子蛋白(REF)、17.5 kDa热激蛋白家族、膜联蛋白以及类似REF与胁迫相关蛋白1。5、在MCO系统中HbTCTP具有保护超螺旋DNA免受破坏,说明HbTCTP具有抗金属离子催化氧化活性。6、构建了HbTCT 过表达载体,并通过农杆菌介导成功将目标基因导入本生烟草,共获得17株HbTCTP过表达烟草阳性植株,为进一步研究HbTCTP的功能奠定了基础。