【摘 要】
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先天性巨结肠(Hirschsprung’s disease,HSCR)是小儿普外科常见的消化系统畸形,病变肠管粘膜下及肌间神经丛缺乏神经节细胞,肠管无法正常蠕动,导致肠管持续处于痉挛状态,形成
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先天性巨结肠(Hirschsprung’s disease,HSCR)是小儿普外科常见的消化系统畸形,病变肠管粘膜下及肌间神经丛缺乏神经节细胞,肠管无法正常蠕动,导致肠管持续处于痉挛状态,形成功能性肠梗阻。本研究通过病例对照研究结合高通量miRNA芯片技术检测先天性巨结肠无神经节细胞段肠管(狭窄肠管)的miRNA表达,结果提示巨结肠病变肠管与对照组之间的miRNA表达谱存在显著差异。采用特异性探针实时荧光定量聚合酶链反应方式(qRT-PCR)对标本中miRNA-147、miRNA-1303、miRNA-320、miRNA-133b 的表达水平进行检测,初步研究相关miRNA在先天性巨结肠肠管组织中的差异性表达及意义。目的:研究相关miRNA在先天性巨结肠肠管组织中的差异性表达及意义。方法:选取苏州大学附属儿童医院普外科33例先天性巨结肠无神经节细胞段肠管,以及32例非先天性肠神经相关疾病行肠造瘘术或结肠部分切除所得结肠组织标本,采用TRIzol法提取相应肠管组织标本总RNA并纯化,逆转录试剂盒合成cDNA,应用特异性探针qRT-PCR检测组织标本的相关miRNA表达水平,结合microT-CDS数据库以及TargetScan数据库对相关miRNA进行靶基因预测并取交集,对差异性表达的基因采用基因本体分析(Gene ontology,GO)和KEGG富集分析(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)。结果:miRNA-1303与miRNA-147在先天性巨结肠样本中呈高表达,存在统计学意义(分别为p=0.0052与p<0.0001),ROC曲线下面积(AUC)分别为0.6998(95%CI:0.5693,0.8304;p=0.0056)和 0.8258(95%CI:0.7236,0.9280;p<0.0001);miRNA-320在先天性巨结肠样本的异常表达无统计学意义(p=0.0894),AUC 为 0.6231(95%CI:0.4848,0.7614;p=0.0880);miRNA-133b 结果无明显差异(p=0.1229),AUC 为 0.6117(95%CI:0.4701,0.7534;p=0.1215)。基因本体分析(Gene ontology,GO)和 KEGG 通路富集分析(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)提示miRNA-1303和miRNA-147的靶基因主要涉及生物调节、蛋白结合、Hippo通路等多种生物过程及信号通路。结论:miRNA-1303与miRNA-147在先天性巨结肠样本中呈高表达,可能参与先天性巨结肠的发病过程。miRNA-320在先天性巨结肠发病机制中作用尚无法确定。miRNA-133b不参与先天性巨结肠的发病机制。
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