【摘 要】
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利用反义RNA技术抑制EGFR的表达,以研究下调EGFR的表达对CNE-2Z细胞增殖及相关恶性行为的影响.引进了EGFR反义RNA表达的逆转录病毒载体,脂质体介导转染包装细胞PA317,G418筛
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利用反义RNA技术抑制EGFR的表达,以研究下调EGFR的表达对CNE-2Z细胞增殖及相关恶性行为的影响.引进了EGFR反义RNA表达的逆转录病毒载体,脂质体介导转染包装细胞PA317,G418筛选,NIH3T3细胞阳性克隆检测病毒滴度(2.1-3.8×10<5>CFU/ml).收集混合克隆病毒上清感染靶细胞CNE-2Z,以G418筛选,获得10个反义表达载体转染的CNE-2Z/AS阳性克隆和3个空载体转染的CNE-2Z/pLXN阳性克隆.PCR证实,外源基因序列能稳定整合人受体细胞基因组内.放射配体竞争结合实验表明,反义RNA的表达下调细胞膜上EGFR数目,而转染空载体组其受体数与CNE-2Z对照相近.透明电镜和倒置镜下观察表明,反义RNA表达的克隆细胞组与对照组(CNE-2Z)及空载体转染细胞形态无明显差异,只是胞内具有较大的空泡.反义RNA的表达使细胞生长速率和软琼脂集落形成能力受到不同程度的降低.将反义RNA表达的克隆细胞组、空载体转染的克隆细胞组分别接种裸鼠皮下,反义克隆细胞组在裸鼠体内成瘤时间晚,致瘤性及自发转移能力降低.作者的研究表明,EGFR的表达水平确与鼻咽癌的发生、发展有关,反义RNA能部分降低细胞的恶性及致瘤性,但不能完全逆转细胞的恶性表型.
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