【摘 要】
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疾病是危害畜牧生产的大敌,传统的防疫治病措施不仅成本昂贵,还会引发药物残留等问题,对畜禽产品的食用安全带来巨大威胁。从长远角度来看,用遗传学的方法开展抗病育种,从本
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疾病是危害畜牧生产的大敌,传统的防疫治病措施不仅成本昂贵,还会引发药物残留等问题,对畜禽产品的食用安全带来巨大威胁。从长远角度来看,用遗传学的方法开展抗病育种,从本质上提高畜禽对病原微生物的抗性,才是解决问题的根本途径。抗病育种的关键是揭示疾病发生的分子机制,确定主效基因和分子标记。本课题组利用Solexa高通量测序技术在猪呼吸道上皮细胞内筛选抗病毒候选基因时,发现有一个tag的表达量受至Poly(I:C)的显著调控。基因组比对分析表明,这个tag对应于猪Ⅱ型成对免疫球蛋白样受体(paired immunoglobulin-like type2receptor,PILRs)基因。进一步分析发现,该基因在猪上尚未得到实验克隆。因此,本研究以PILRs为候选基因,利用分子生物学方法对其进行克隆、组织表达和诱导表达研究,并利用双荧光素酶报告系统研究变异剪接对PILRB基因表达的影响,为揭示PILRs在免疫应答过程中的功能和表达调控机制奠定基础。主要研究结果如下:(1)首次克隆了猪PILRA基因的3个变异剪接体(GenBank accession No.KJ143679、 KJ143680.KJ143681),开放阅读框长度依次为816、765和852bp,分别编码271、254和283个氨基酸残基的多肽链。(2)RT-qPCR分析表明,PILRA的3个变异剪接体和PILRB的4个变异剪接体在心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、胃、肌肉、淋巴、大肠、小肠和膀胱等11种组织中均有不同程度的表达,且二者表达规律大致相同:在脾脏中表达量最高,肝脏、肺和淋巴其次,在肌肉中表达量最低。(3)在Poly(I:C)处理的PK15细胞内,PILRA基因的表达量降低、PILRB基因表达量增加,并且二者的表达与Poly(I:C)呈现出时间-剂量依赖效应。(4)克隆了猪PILRB基因3个变异剪接体的3’UTR,分析了3’UTR区的变异剪接对PILRB转录表达的影响,发现3’UTR区的片段缺失影响着PILRB基因的转录,并且缺失片段越大,转录量越低。
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