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多环芳烃是一类在环境中有广泛分布的有机化学污染物,具有“三致”性(致畸、致突变、致癌),通过食物链的传递会对生态环境和人体健康造成极大危害。微生物修复是消除PAHs污染的有效方式。研究降解菌的遗传控制、探索代谢途径、解析相关酶系和功能基因,从而构建基因工程菌株用于污染环境的生物修复是当前研究的热点。本论文对一株筛选自厦门博坦油码头表层海水的高效菲降解细菌Sphingomonas sp.H的生理生化特征、对PAHs的降解特性、降解条件、降解关键酶基因、差异表达蛋白质组等方面进行了较为系统的研究,获得的主要结果如下:1.降解能力测定显示,鞘氨醇单胞菌H能以菲和荧蒽作为唯一碳源生长,并能利用PAHs代谢途径中的中间产物,包括2—萘酚、水杨酸、邻苯二酚、苯酚和原儿茶酸。利用均匀设计对鞘氨醇单胞菌H降解菲的条件进行优化,DPS软件数据处理系统分析表明在接种量OD600为0.5,菲起始浓度为498.467 mg L-1,降解时间为47.099 h时,降解速率最大为8.104 mgL(-1(h-1,降解率可达76.6%。2.通过引物设计的方法,从鞘氨醇单胞菌H中扩增得到全长的邻苯二酚-2,3-双加氧酶基因(C230),从分子生物学角度证明了PAHs降解过程中的重要酶系邻苯二酚-2,3-双加氧酶(C230)在鞘氨醇单胞菌H中的存在。对C230基因构建了重组表达载体,成功在表达宿主大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行表达,基因在宿主中以溶解蛋白和包涵体形式同时存在。可以进一步推断鞘氨醇单胞菌H降解菲的基本途径是在C230的作用下经由水杨酸途径问位裂解(meta-cleavage)苯环,生成2-羟基粘康酸半醛(2-HMS),从而降解菲。3.采用2-DE(双向凝胶电泳)结合LC-MS/MS(串联质谱),研究鞘氨醇单胞菌H在菲诱导与无菲诱导(对照)状况下的蛋白质表达,对差异蛋白的生物质谱结果进行分析,得到多个代谢途径中的关键酶(加氧酶、脱氢酶、醛缩酶等),结合鞘氨醇单胞菌H的降解特性与降解基因的研究结果,最终推导出鞘氨醇单胞菌H降解菲较为完整的代谢途径。