器官移植现已成为挽救和延长患者生命的有效手段，但器官移植术后的排斥反应成为影响其成功率的主要原因。为了降低排斥反应的发生率，提高器官移植的成功率，目前需要病人终生使用免疫抑制剂。然而，长期使用免疫抑制剂除了会引起免疫抑制剂本身的毒副作用外，也可引起严重感染、恶性肿瘤的发生，从而影响器官移植的成功率和受者的长期存活率。若能造成移植宿主对移植抗原的免疫耐受状态或低免疫应答状态，同时保持对其它抗原免疫应答的反应能力(包括抗肿瘤免疫和抗感染免疫等)，即可避免或减轻这些副作用的产生，这是目前解决排斥反应的根本途径。激活的T细胞是造成排斥反应的罪魁祸首，我们根据基因工程的方法提取蓖麻毒素A链mRNA，构建蓖麻毒素A链的载体，并表达蓖麻毒素A链蛋白作为攻击激活的T淋巴细胞的弹头，造成宿主低免疫应答状态。 蓖麻毒素A链蛋白为蓖麻毒素的有毒部分，本实验为制造特异性杀伤的生物导弹弹头，特研究蓖麻毒素A链克隆载体的构建、蛋白表达及蛋白纯化。为以后的研究奠定基础。 本实验首先从蓖麻豆中提总mRNA，将其反转录成cDNA，并通过计算机辅助自行设计引物，通过PCR扩增蓖麻毒素A链DNA，装入pcDNA3.1载体，筛选带有插段的阳性克隆，进行目的基因DNA序列分析。经序列测定，证实基因正确无误。再将测序正确的ricin A基因亚克隆入大肠杆菌融合表达载体pRSET A中，经酶切鉴定后将重组表达载体命名为pRSET A-ricin A。将pRSET A-ricin A转化大肠杆菌BL21(DE3)，用IPTG诱导pRSET A-ricin A的表达。SDS-PAGE结果表明，出现了可溶性的表达产物。以镍金属螯合柱纯化目的蛋白，并采用四唑盐比色试验(MTT法)研究了其对肝癌细胞 第四军医大学硕士论文SMMC．7721的杀伤活性。实验结果表明，表达产物有一定的细胞杀伤毒性。 蓖麻毒素A链蛋白作为一种生物弹头，在特异的细胞杀伤中有很好的应用前景。可以和各种特异的抗体结合，对细胞进行杀伤。本文克隆表达了蓖麻毒素A链蛋白，为以后的实验奠定了基础。