【摘 要】
:
KLF4和SOX2是重要的细胞转录因子,但其在中华绒螯蟹中从未报道,且在中华绒螯蟹精子发生过程中的功能也尚未被探明。我们首次克隆得到中华绒螯蟹es-klf4和es-sox2的CDS序列。初步研究显示,在中华绒螯蟹精巢、输精管和储精囊中Es-KLF4和Es-SOX2的m RNA和蛋白水平均呈现高表达。荧光原位杂交结果显示,es-sox2和es-klf4 m RNA信号在各时期生殖细胞的细胞核和细胞质
论文部分内容阅读
KLF4和SOX2是重要的细胞转录因子,但其在中华绒螯蟹中从未报道,且在中华绒螯蟹精子发生过程中的功能也尚未被探明。我们首次克隆得到中华绒螯蟹es-klf4和es-sox2的CDS序列。初步研究显示,在中华绒螯蟹精巢、输精管和储精囊中Es-KLF4和Es-SOX2的m RNA和蛋白水平均呈现高表达。荧光原位杂交结果显示,es-sox2和es-klf4 m RNA信号在各时期生殖细胞的细胞核和细胞质中均表达强烈。体腔注射ds RNA靶向敲低Es-KLF4和Es-SOX2后,大量生殖细胞的DNA受到损伤,细胞凋亡水平和增殖能力显著升高,并伴随大量处在发育II、III的精细胞及成熟精子的细胞核畸形。为探明Es-KLF4和Es-SOX2是否会受到微环境的影响从而改变其功能,本课题在体外HEK293T细胞系中过表达Es-KLF4和Es-SOX2。在过表达Es-KLF4后,处于增殖状态的细胞比例显著降低,细胞被阻滞在G1/S期,细胞周期相关的蛋白表达量显著下降。与过表达Es-KLF4的结果相反,过表达Es-SOX2后,处于增殖状态的HEK293T细胞比例显著增加,S期细胞比例显著增加,细胞周期相关的蛋白表达量显著升高。在ds SOX2组的精巢中,Es-KLF4的转录水平和蛋白表达量显著降低,而在ds KLF4组的精巢中,Es-SOX2的转录水平和蛋白表达量则没有显著变化。启动子和DNA结合位点预测结果显示,在es-klf4启动子区域存在一条同时包含EsSOX2 DNA结合位点和es-klf4启动子的序列。进一步的染色质免疫共沉淀结果显示,在中华绒螯蟹精巢中该条序列与Es-SOX2蛋白具有天然结合的情况,并且双荧光素酶报告基因实验显示Es-SOX2对该条序列具有显著的转录调控作用。综上所述,在中华绒螯蟹精巢中,Es-SOX2能够通过直接调控Es-KLF4基因的转录,参与调节中华绒螯蟹的精子发生过程中的细胞周期、细胞凋亡和精核重塑等生理过程。值得一提的是,Es-SOX2和Es-KLF4的功能可能与其所处的微环境相关,在不同的细胞环境中,它们的功能可能会发生逆转。
其他文献
紫外线(UV)辐射会对人类造成许多危害,包括引起皮肤黑化和光老化,以及引发急性晒伤和色素沉着在内的表皮损伤等。在细胞水平上,UV辐射导致最主要的DNA损伤是两种光产物,即环丁烷嘧啶二聚体(CPD)和嘧啶-嘧啶酮(6-4)光产物(6-4PPs)。CPD损伤是UV辐射导致细胞死亡的主要细胞毒性病变,人类细胞需要一套非常复杂的修复系统来清除核DNA上的CPD。然而在微生物、植物和少数动物中存在CPD光解
1,4-二氧六环(1,4-Dioxane,1,4-D)是一类广泛存在于水环境中的有机污染物,具有潜在致癌性、难以生物降解且与氯化剂的共污染现象普遍,难以得到有效清除。因此1,4-D污染的环境问题受到了研究者的广泛关注。目前分离得到的1,4-D降解菌株种类较为单一,降解效率普遍较弱,对1,4-D降解过程中微生物相互作用的了解也较为有限。本研究以从活性污泥富集的1,4-D降解菌群CH1以及从中分离的降
黑腹果蝇唐氏综合征细胞粘附分子(Dscam1)含有4个可变外显子簇,可以通过互斥可变剪接产生38,016种不同的蛋白质亚型。外显子4、6和9簇之间的可变剪接是相互独立的。外显子9簇包含33个可变外显子,编码完整的免疫球蛋白7(Ig7)结构域。Dscam1亚型可以作为细胞表面受体参与神经环路的组装,对神经元发育有重要作用。已有研究表明,果蝇神经元正常发育需要数千种Dscam1亚型的表达。那么,数万种
微塑料是近年来被人们所熟知的新型污染物,本身具有难降解性和迁移富集的能力,对地球生态造成了较严峻的污染。在自然的复杂环境中,微塑料往往不是单独存在,而是与其它污染物结合形成联合污染物。典型污染物壬基酚(nonylphenol,NP),是工业中的表面活性剂,被广泛应用在塑料包装、橡胶制品、日常护理用品等产品中。鉴于微塑料和NP都是环境中广泛存在的污染物,故两者的联合污染难以避免,且它们对生物的威胁是
食源性疾病是一类通过摄食致病因子污染的食物从而引发机体感染或中毒的疾病总称,跨区域传播、易暴发、变化快且难预测,给公共卫生系统和国家财政带来沉重的负担。其中,食源性致病菌作为引发食源性疾病的重要因素,已经引起各界的广泛关注。针对食源性致病菌的检测,现行金标准是细菌分离培养鉴定法。该法检测时间长、依赖操作手法、有一定的漏检率,无法应用于现场检测。微流控芯片作为蓬勃发展的技术之一,具备样品消耗少、自动
着丝粒是染色体上的特殊位点,引导细胞分裂期间染色体的分离。CENP-A是组蛋白H3的变体,在大多数真核生物中特异性表观遗传标记着丝粒的位置,并作为动粒组装的基础。在一个物种中,着丝粒CENP-A核小体定位水平相对恒定并对于染色体的精确分离有预期重要作用。然而,不同真核生物中着丝粒区域CENP-A核小体的定位水平千差万别。目前,着丝粒CENP-A的定位水平如何影响着丝粒的功能与核型稳定性还未明确。通
黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)Dscam1基因包含4个可变外显子簇,即外显子4、外显子6、外显子9、外显子17簇,经互斥可变剪接可以产生38016种Dscam1蛋白亚型。Dscam1蛋白通常表现同源结合的特性,即相同的Dscam1蛋白亚型彼此结合而不同的Dscam1蛋白亚型绝大多数情况下不会相互结合。Dscam1蛋白亚型多样性为神经元的自我身份识别提供分子基础,相同Ds
哺乳动物的精子发生是从精原干细胞发育成精子的一个复杂的细胞分化过程,可以分为三个阶段:精原细胞的自我更新和分化、精母细胞减数分裂形成单倍体圆形精细胞,以及圆形精细胞发生一系列形态变化形成成熟的长形精子,任一阶段出现错误都可能会导致精子形态异常或发育停滞。男性不育的一大诱因是精子发生障碍,但是针对精子发生的调控机制和致病机理的研究还有很多未知内容。本研究中,我们利用酵母双杂交筛选来探究精母细胞减数分
可变剪接是调控基因表达和产生蛋白质多样性的重要机制,黑腹果蝇唐氏综合征细胞粘附因子(Dscam1)基因是可变剪接的经典案例,它通过外显子4簇、6簇和9簇的互斥可变剪接,可以潜在产生19,008种不同胞外域蛋白亚型。Dscam1蛋白多样性对神经元组装和识别至关重要,此外,Dscam1在免疫系统中能够吞噬细菌并帮助宿主抵御病原。然而,过去对Dscam1的研究多集中于外显子4簇和9簇,而对外显子6簇的系
种子生产、散落(种子雨)和在土壤中的储存(土壤种子库)是种子植物生活史的重要过程。这些过程是森林种群和群落更新的关键因素,并受到生境片段化的影响。目前,中国的生境片段化问题较为严重,而千岛湖正是研究生境片段化效应的理想平台。因此,探究片段化生境中种子雨和土壤种子库及其影响因子,对了解生境片段化中植物群落的更新机制具有十分重要的意义。本研究以千岛湖库区的29个样岛为平台,进行种子雨和土壤种子库研究。