亚硒酸钠(Na2SeO3)通过线粒体途径诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡及其机制的初探

来源 :广东医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lifenfeng
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
[目的]  鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我国南方和东南亚地区高发的头颈部恶性肿瘤。众多研究证实亚硒酸钠(Sodium selenite,Na2SeO3)具有预防和治疗多种癌症的功效。本研究旨在通过探索Na2SeO3对鼻咽癌细胞株CNE-2增殖,周期及凋亡的作用效应及潜在机制,为硒应用于临床治疗肿瘤提供一定的分子依据。  [方法]  1.细胞增殖及毒性的检测: CCK8试剂盒法连续五天监测不同浓度Na2SeO3对CNE-2的增殖抑制效应。GraphPad Prism5.0软件分析Na2SeO3对CNE-2细胞的IC50,筛选后续实验药物的浓度梯度,光学显微镜下观察不同浓度Na2SeO3作用下CNE-2细胞形态学的改变。  2.细胞周期的检测:溴化丙啶单染法检测Na2SeO3对CNE-2细胞周期的影响。  3.细胞凋亡的检测:DAPI染色法及Hochest33258染色法观察凋亡细胞核的改变,荧光显微镜采集图像观察对比;琼脂糖凝胶电泳法进行DNA片段的分析;FITC-PI双染检测不同浓度Na2SeO3对CNE-2细胞凋亡率的影响。  4.细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)及细胞线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP)的检测:ROS试剂盒及MMP试剂盒法,检测不同浓度Na2SeO3作用后CNE-2细胞内活性氧及细胞线粒体膜电位的改变,荧光显微镜采集图像观察对比。  5.细胞蛋白表达谱的改变:Western blotting观察各浓度Na2SeO3作用后CNE-2细胞内蛋白表达谱的变化,并使用ImageJ软件分析各种蛋白相对表达量的改变。  6.结果处理:采用Adobe Photoshop CS6软件整理图片;SPSS19.0统计软件统计分析数据,GraphPad Prism5.0软件输出图片。  [结果]  1.在2、5、10、20、50、100μmol/L的浓度范围内,连续五天的监测结果显示:Na2SeO3以时间和剂量依赖性方式抑制CNE-2细胞增殖;通过Na2SeO3对CNE-2细胞的IC50,筛选出药物后续最佳实验浓度梯度为5、10、20μmol/L;光学显微镜下观察到随着药物浓度的增加,细胞形变更加明显。  2.不同浓度(5、10、20μmol/L)Na2SeO3均能诱导CNE-2细胞发生周期阻滞,其中低浓度组(5μmol/L)诱导CNE-2细胞阻滞于S期;中浓度及高浓度(10、20μmol/L)组诱导CNE-2细胞阻滞于G0/G1期。  3.Na2SeO3处理组CNE-2细胞经DAPI及Hochest33258染液染色后,均能见到深染、固缩、碎裂的凋亡形态细胞核,且随着药物浓度增加,凋亡细胞数目明显增多;琼脂糖凝胶电泳分析DNA片段观察到药物作用组出现凋亡细胞特征性DNA ladder电泳图谱;FITC-PI双染法流式细胞仪检测结果显示不同浓度Na2SeO3诱导的CNE-2凋亡率随着Na2SeO3浓度的增加而显著升高。  4.随着Na2SeO3浓度的增加,CNE-2细胞内活性氧水平逐渐升高,细胞线粒体膜电位逐渐降低;线粒体相关促凋亡蛋白Bax、Bak及caspase-3表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-XL及PARP表达下调。  [结论]  (5、10、20μmol/L)Na2SeO3抑制鼻咽癌CNE-2细胞的增殖,引起其S期或G0/G1期阻滞,并通过Bax依赖的线粒体通路诱导其凋亡。本次研究首次揭示Na2SeO3可以通过Bcl-2蛋白家族调节的线粒体途径以及下游caspase-3的激活来发挥对CNE-2细胞的抗癌作用,因此,支持Na2SeO3或可作为鼻咽癌诱导凋亡类药物的可能。
其他文献
根据采场底板岩体结构特征,建立了底板岩体的关键层(KS)结构模型。应用KS结构模型分析了采场底板突水机理,并取得了满意的效果。 According to the structural characterist
5月18日上午,洛阳市小学教育实验研究会六位校长的“校长讲校”和“牡丹论道”活动让航空城会议中心洋溢着浓浓的学术氛围。“牡丹论道”由安峰教授主持,围绕学校发展的关键
初中科学是一门综合性学科,随着素质教育的全面普及,该门学科也受到了我们越来越多地关注,但是目前初中科学这门学科教学的现状并不乐观,在教学中还是存在着碎片化和应试化的现象
随着我国社会环境的不断发展,环境保护的认识逐渐深化,因此促进了环境监测应用的快速发展,并且在我国市场经济改革的带动下,促进环境监测的市场化已经成为了改变原有环境监测体制
学校,到底是什么?学校就是学生爱上学习的地方。课程,到底为什么?一句话,为了师生的共同发展。课程是学校管理的核心,更是学校的品牌价值核心。当课程成为教师发展的脚手架,
气溶胶(Aerosol)是液体或固体微粒均匀分散于气体中所形成的一种悬浮系统,微粒直径范围为0.01μm~100μm。当其携带有一定量的负电荷时称为荷负电气溶胶。 空气中存在着各种
目的对比观察全胸腹腔镜肺叶切除与开胸肺叶切除治疗Ⅰ、Ⅱ期非小细胞肺癌的临床效果。方法收集2014年6月—2015年6月期间行手术治疗的110例Ⅰ、Ⅱ期非小细胞肺癌患者的临床
设计了一维窗函数滤波因子, 并采用快速傅立叶变换(FFT) 技术对声波全波列测井波形进行了频率滤波, 获得了较纯的纵、横波和斯通利波波形。通过频率特性分析, 获得全波频率信息、能量
2012年3月1日,我们一行10余人跟随勐海县委副书记张世影,到勐海县农业和科技局“四群”教育挂钩联系点西定乡旧过村委会调研。经过2个多小时的行程,我们到达了旧过村委会。通
目的:研究多层螺旋CT(MSCT)灌注成像在早期急性缺血性脑卒中(AIS)的临床应用价值,个体化评价脑血流动力学状况。 方法:对2004年11月至2005年12月在徐州医学院附属医院神经内