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猪腹泻性疫病始终是危害养猪业健康良好发展的主要威胁因素之一,2012年,猪Delta冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCoV)HKU15首次登陆中国香港,随后在我国多个地区蔓延流行开来。PDCoV对不同年龄段的猪均有易感性,其中尤以对哺乳仔猪的危害最为严重,以呕吐、脱水、剧烈腹泻等为主要临床特征,发病率和死亡率均较高。目前,我们对PDCoV的研究还存在许多未知,而且也没有商品化疫苗用来防控该病的发生。迄今为止,PDCoV已经在中、美、韩等世界上多个国家和地区发生流行,严重危害了养猪业健康良好发展。因此,展开针对PDCoV流行病学调查、病毒的分离鉴定、检测诊断方法的建立等科学研究已势在必行。本次研究对河北省规模化养猪场泻仔猪的肠道及其肠内容物进行了收集、检测,将PDCoV阳性样本接种于LLC-PK1细胞中盲传至第6代,出现了典型细胞病变;经RT-PCR检测、细胞病变的观察以及全基因组测序、进化树分析等方法证实已成功分离得到了PDCoV阳性毒株,将其命名为CHN-TS1-2019株(GenBank NO.MT663769)。参考GenBank中公布的PDCoV基因序列设计了一对特异性PCR扩增引物,扩增出CH-TS1-2019株N基因,将其与pET-30a(+)表达载体相连,构建了pET-30a-PDCoV-N重组质粒,把重组质粒转化至E.coli BL21表达菌株中,经IPTG诱导表达PDCoV N蛋白,用纯化的N蛋白与弗氏佐剂混合后作为抗原免疫BALB/c小鼠,用免疫小鼠脾细胞与SP2/0瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,用间接免疫荧光和Western Blot验证单克隆抗体(MAb)的特异性反应。经筛选鉴定后最终成功得到了三株(3F8、8B7、9D3)稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,抗体效价分别为100×2~8、100×2~7、100×2~9。3F8和8B7株单抗的重链和轻链分别为IgG1亚型和κ亚型;9D3株的重链为IgG2b亚型,轻链为λ亚型。抗PDCoV N蛋白单克隆抗体的成功研制为该病的控制、蛋白功能的研究以及血清学检测方法的建立提供了有价值的材料。