电针对胫骨骨折后产生PND的老年小鼠学习记忆能力及mTOR信号通路的影响

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目的:研究电针(Electroacupuncture,EA)治疗对胫骨骨折(Tibial Fracture,TF)后产生PND(Perioperative Neurocognitive Dysfunction)的老年小鼠学习记忆能力及mTOR信号通路的影响。方法:选用120只16月龄雄性C57小鼠,按照随机分组的方法将其中108只分成三组(剩余小鼠继续饲养),空白对照组(n=36),手术组(n=36),电针组(n=36)。每组36只小鼠,术后1,3,7天三个时间点各12只。手术组和电针组建立胫骨骨折模型并给予腹腔注射LPS(初始浓度为10mg/ml),每只小鼠给药量为10mg/kg,连续注射3天。电针组选用“百会”,“足三里”两个穴位,选择疏密波(2m A+2/15Hz),时间30min,每日一次,连续电针7天。室温下水迷宫实验测试判定产生认知障碍后1d,3d,7d,于3个时间点首先行水迷宫实验测试小鼠认知功能,再将小鼠以颈椎脱位法处死,于冰上取海马后冷冻于-80℃冰箱,分别用ELISA法测量海马组织内IL-1β、TNF-α、Aβ含量,Western blot法测量p-mTOR、p-Tau、p-P70S6K含量。结果:术前,各组在剔除掉异常运动能力小鼠后,其余小鼠的自主活动能力没有差别。术后,与对照组相比,建模小鼠在水迷宫实验中游行速度虽有下降但无统计学意义(P>0.05)。术后1天,手术组和电针组在空间探索实验中穿越平台次数减少,定位巡航实验中逃避潜伏期增加(P<0.05),两组小鼠均建模成功。术后3天及7天,手术组在空间探索实验中仍表现为穿越平台次数减少,定位巡航实验中逃避潜伏期增加(P<0.05),但两次测试结果并无明显差异(P>0.05)。术后3天,电针组穿越平台次数增加,逃避潜伏期缩短,但与手术组相比无统计学意义(P>0.05)。术后7天,电针组穿越平台次数明显增加,逃避潜伏期明显缩短,与手术组相比有统计学意义(P<0.05)。建模后第1天与对照组相比,手术组和电针组海马内IL-1β、TNF-α、Aβ以及p-mTOR、p-Tau、p-P70S6K的蛋白含量均产生了明显升高(P<0.05)。术后3天,与手术组相比电针组相关蛋白含量并无明显降低,无统计学意义(P均>0.05)。术后七天,电针组海马内IL-1β、TNF-α、Aβ以及p-mTOR、p-Tau、p-P70S6K的蛋白含量较手术组均下降,但仍比对照组要高(P<0.05)。结论:电针“百会”、“足三里”穴位可以通过抑制脑内mTOR信号通路,进而减少了Aβ蛋白沉积,减少中枢神经系统的炎症反应,从而改善了胫骨骨折老年小鼠的学习和记忆能力。
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