免疫九肽的生产制备及纯化工艺研究

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脂肪代谢或运转异常使血浆一种或多种脂质高于正常称为高血脂症。高血脂症是一种全身性疾病,是指血中胆固醇(TC)和/或甘油三酯(TG)过高或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)过低,现代医学称之为血脂异常。近年来,随着人们的生活水平不断提高,饮食结构及生活方式的变化,人群的血脂水平总体上在逐年升高。人们对高血脂危害的认识不断加深,而研究者们对控制高血脂的研究也越来越重视,都在探寻能有效治疗高血脂的药物。本文中的多肽是用肽库技术筛选出的模拟多肽,能调节机体细胞代谢,减少有毒代谢物质的产生,从而提高机体的免疫力。临床表现在能增强毛细血管弹性并降低血浓度,降低血脂提高血氧含量,是极具医药价值的多肽,具有十分广阔的市场前景。本研究在于建立适合于大规模生产免疫九肽的合成及纯化生产工艺,为免疫九肽新药研究和应用提供保证。本实验采用Fmoc-固相多肽合成原理,以2-Chlorotrityl Chloride树脂为固相载体,以HOBT/TBTU/DIEA为催化剂,DMF为溶剂和清洗剂,TFA/EDT/H2O为切割剂,以自行设计的合成器作为设备,建立适于大规模生产的免疫九肽合成生产工艺及设备体系;从合成载体的选择、氨基酸的选择、切割试剂的选用等方面研究了免疫九肽的合成工艺,通过封闭残余树脂等工艺提高了缩合率,系统完整的建立了整套生产工艺路线。合成的多肽以水-乙腈为二元梯度洗脱流动相,以1%三氟乙酸为离子对,用反相高效液相色谱对产物进行纯化,其纯化产物经冷冻干燥后为白色粉末状,纯度大于98%;用质谱分析其相对分子量,用HPLC分析纯肽产物并与标准品对照其色谱保留值,结果一致。此合成纯化工艺操作简单、周期短、合成效率高、成本低、适合于规模化生产。
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