为了研究HNTX-Ⅳ结构与功能的关系，用芴甲氧羰基(Fomc)固相多肽合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代HNTX-Ⅳ第12位丝氨酸(Ser12)的突变体S12A-HNTX-Ⅳ和替代第29位精氨酸(Arg29)的突变体R29A-HNTX-Ⅳ。HPLC纯化的突变体经谷胱甘肽法氧化复性，结果证明，5mmol/LGSH、0.5mmol/LGSSG、0.1mmol/LTris、0.1mmol/LNaCl，pH7.4是氧化复性的最佳反应条件。复性的多肽经MALDI-TOF质谱鉴定，比线性分子少6个质子，说明6个半胱氨酸形成了3对二硫键。 　　用一维核磁共振波谱法分析突变体的空间结构的变化。S12A-HNTX-Ⅳ和天然HNTX-Ⅳ(nHNTX-Ⅳ)的1D1H-NMR谱图的酰胺质子区域非常相似，说明它们具有相似的分子折叠方式，Ser12被Ala替换后没有引起分子空间结构的明显变化；然而，R29A-HNTX-Ⅳ分子中有些氨基酸残基酰胺质子的化学位移值发生了一定的变化，但毒素分子的整体空间结构并没有发生明显的差异。 　　本研究说明Ser12与HNTX-Ⅳ的生物学活性无关或关系不大，而Arg29是与HNTX-Ⅳ生物学活性相关的关键残基之一。推测R29A-HNTX-Ⅳ活性的降低是由于Ala替代Arg后改变了HNTX-Ⅳ与受体作用的位点，而不是由于毒素分子整体空间结构变化所致。 　　本文以胰酶和胶原酶消化和未经酶消化的DRG细胞为材料，以差速离心和蔗糖密度梯度离心相结合的方法分离纯化得到质膜。用裂解液抽提出质膜蛋白，并用丙酮沉淀法进行蛋白浓缩和纯化。用westernblotting技术证实了分离的质膜材料的可靠性。用一维聚丙烯酰胺凝胶电泳和双向电泳对膜蛋白进行分离，将考马斯亮蓝和硝酸银染色显示的条带和部分荧光染色的点切下，经脱色/去染料，还原和烷基化处理后，用胰蛋白酶进行酶解，再用CapLc-ESI-Q-TOF和UitraflexTOF-TOF分析，然后将所得的MS和MS/MS数据用MASCOT软件在NCBInr数据库中搜索从而对蛋白质点进行鉴定。从一维和二维电泳凝胶上共鉴定出88种蛋白质，其中有19个是膜或与膜相关的蛋白，如电压依赖性离子选择通道蛋白1，髓磷脂碱性蛋白S和转运蛋白AnnexinA2等。