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第一部分PCFs调控RSV感染后IFN-α/β-STAT1介导的抗病毒免疫应答目的:RSV是引起全球婴幼儿下呼吸道感染最常见的病毒病原,目前尚缺乏特效的疫苗及抗病毒药物防治RSV感染。前期研究发现辣椒素去除PCFs小鼠(KPCF小鼠)感染RSV后病毒滴度降低,提示PCFs参与了RSV感染后抗病毒效应。以IFN-α/β产生为特点的抗病毒免疫应答在防御病毒感染中起重要作用。病毒入侵后IFN-α/β的产生始于PRRs识别病毒成分,IFN-α/β分泌后激活STAT1,诱导ISGs产生发挥抗病毒作用。因此,我们推测去除PCFs后可能促进RSV感染后IFN-α/β的产生,进而增强抗病毒免疫应答。方法:收集正常BALB/c小鼠(Intact小鼠)及KPCF小鼠感染RSV后12h,24h及48h标本,检测“PRRs-IFN-α/β-STAT1-ISGs”抗病毒信号通路中如下重要分子的水平:RIG-1,TLR3,TLR4;IFN-α,IFN-β;STAT1,p STAT1;IP-10,Mx1。结果:KPCF小鼠感染RSV后肺组织中RIG-1及TLR3 m RNA表达明显升高,BALF中IFN-α及IFN-β水平明显升高,STAT1 m RNA及p STAT1蛋白表达明显升高,BALF中IP-10分泌及肺组织中Mx1m RNA表达均明显升高,以感染后12h升高最为明显。结论:去除PCFs后增强了RSV感染诱导的IFN-α/β-STAT1抗病毒免疫应答,以感染后12h抗病毒效应最明显。第二部分VIP经IFN-α/β-STAT1信号通路参与PCFs调节RSV诱导的抗病毒免疫应答目的:PCFs通过分泌神经肽如SP、CGRP、VIP等发挥生物学效应。研究提示神经肽影响病毒的复制。我们推测去除PCFs后可能引起某些神经肽增加促进RSV诱导的IFN-α/β-STAT1抗病毒免疫应答。方法:1.收集Intact及KPCF小鼠感染RSV后12h,24h及48h标本,ELISA检测BALF中SP、CGRP及VIP的分泌水平。2.KPCF小鼠予VIPhyb(一种泛VIP受体阻断剂)处理,Intact小鼠分别予VIP或VPAC1激动剂处理,RSV感染后12h分别收集肺组织及BALF,检测RIG-1,TLR3,IFN-α,IFN-β,STAT1,p STAT1,IP-10及Mx1水平。收集感染后第3天肺组织匀浆,空斑实验检测RSV病毒滴度。结果:1.去除PCFs后小鼠BALF中VIP水平增加。2.VIPhyb处理的KPCF小鼠感染RSV后12h肺组织中RIG-1及TLR3 m RNA表达明显降低,BALF中IFN-α及IFN-β分泌明显减少,STAT1 m RNA及p STAT1蛋白表达明显降低,BALF中IP-10分泌及肺组织中Mx1m RNA均明显降低,肺组织匀浆病毒滴度增加。3.VIP及VPAC1激动剂处理的Intact小鼠感染RSV后12h,肺组织中RIG-1及TLR3 m RNA表达明显增加,BALF中IFN-α及IFN-β分泌明显增加,STAT1 m RNA及p STAT1蛋白表达明显增加,BALF中IP-10分泌及肺组织中Mx1m RNA均明显增加,肺组织病毒滴度降低。结论:去除PCFs增加VIP水平,促进RSV感染后IFN-α/β-STAT1抗病毒免疫应答,降低RSV病毒滴度。第三部分PCFs通过IFN-α影响IFNGR1表达调节RSV感染后IFN-γ介导的急性气道炎症反应目的:前期研究显示,IFN-γ在RSV感染后气道炎症反应的诱导中起重要作用,去除PCFs减轻RSV诱导的气道炎症反应,但IFN-γ依然处于高水平,提示去除PCFs影响IFN-γ介导的炎症效应。IFN-γ通过与其受体IFNGR1结合发挥效应。我们推测去除PCFs后可能下调了RSV诱导的IFNGR1表达,从而减轻了IFN-γ介导的气道炎症反应,其机制可能与IFN-α/β抗病毒免疫应答增强有关。方法:1.Intact及KPCF小鼠感染RSV后第5天,HE染色检测肺组织病理改变,ELISA检测BALF中SP水平,进一步评估气道炎症反应。2.免疫组化及Western Blot检测两组小鼠感染RSV后IFNGR1的表达。3.Intact小鼠给予IFNGR1中和抗体,检测RSV感染后气道炎症反应及BALF中IFN-γ水平。4.检测感染5天时STAT1及p STAT1的表达,并检测感染后1-5天肺组织STAT1及p STAT1的表达。5.重组IFN-α处理Intact小鼠后感染RSV,感染后第5天检测IFNGR1的表达。结果:1.KPCF小鼠RSV感染后肺组织炎症细胞浸润减少,BALF中SP分泌减少。2.Intact小鼠感染RSV后肺组织中IFNGR1表达增加,KPCF小鼠感染后IFNGR1表达明显降低。3.Intact小鼠予IFNGR1中和抗体处理后,BALF中炎症细胞总数尤其是淋巴细胞计数减少,肺组织炎症细胞浸润减少,AHR降低,BALF中IFN-γ水平与RSV组比较无明显差异。4.KPCF小鼠感染后第5天,STAT1基因,蛋白及p STAT1蛋白表达均明显升高,感染后1-5天STAT1及p STAT1表达均持续升高。5.重组IFN-α处理的Intact小鼠感染RSV后IFNGR1表达减少。结论:去除PCFs增强RSV感染后IFN-α介导的抗病毒免疫应答,进而下调IFNGR1,减轻IFN-γ介导的气道炎症反应。