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本研究为抗结核药物的作用靶点及作用机制的研究,分为两个部分。第一部分研究了吡嗪酰胺抗结核杆菌的作用机理,第二部分着重于反义技术抑制结核菌株H37Ra生长的研究。
吡嗪酰胺是一种非传统的抗结核杆菌一线药物,它在体内有较高的抗菌活性,但是在体外的抗菌活性不佳。由于PZA能够杀死半休眠状态的结核杆菌,而其它药物则不能,这使得PZA在缩短9-12个月疗程到现有的6个月疗程上发挥着独特的作用。正是由于PZA的这些特性使得对于PZA的作用机理研究成为热点。然而,由于PZA的特殊性质,PZA的作用机理,作用靶点还不清楚。本实验研究了营养饥饿处理过程对于PZA抗结核杆菌作用的影响,我们还研究了脂肪酸、苯甲酸和水杨酸对PZA抗菌活性的影响。结果表明营养饥饿的处理过程破坏了结核杆菌的膜电位,从而有利于PZA的抗菌作用。PZA对经过5天和10天的营养饥饿过程的结核杆菌有更强的杀菌效果。脂肪酸、苯甲酸和水杨酸对于正常生长的和营养饥饿后的结核杆菌都有促进PZA抗菌效果的作用,对于营养饥饿后的结核杆菌作用更明显。这些结果为PZA的抗菌作用机理提供了新的视点,为进一步研究PZA的抗菌作用机理和有效开发抗结核新药提供一定的理论基础。
反义寡核苷酸作为一种新型的药物,可以用于特异性地抑制基因表达,目前已经用于对多种疾病地治疗研究。肌醇是真核细胞中一种重要的多聚醇,存在于链霉菌属和分枝杆菌属中。肌醇在分枝杆菌中被用于合成分枝硫醇,分枝硫醇在分枝杆菌的氧化应激反应中发挥重要的作用,对细菌的生长和毒力具有重要意义。在本实验中,我们选定编码肌醇-1-磷酸合成酶的ino1基因为靶基因,使用RNASTRUCTUREANALYSIS软件对ino1基因序列的二级结构进行分析,根据序列的自由能及其自身成环的可能性,最终确定了四个硫代反义寡核苷酸的靶位点。根据确定的序列让基因公司合成修饰后的硫代寡核苷酸。将硫代修饰后的反义寡核苷酸通过作用于编码肌醇-1-磷酸合成酶的ino1基因,使结核杆菌中肌醇的合成受到抑制。对结核杆菌进行了体外生长抑制实验,对相关指标进行了检测。结果显示分枝结核杆菌的I-1-P合成酶是反义核酸治疗的一个很有前景的靶位,为反义硫代寡核苷酸成为新型抗结核药物研究提供理论基础。