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蓝舌病病毒（Bluetongue virus,BTV）是蓝舌病（Bluetongue,BT）的病原体,可引起反刍动物出血性疾病。病毒外衣壳由VP2、VP5组成,VP2与VP5相互作用共同促进病毒的附着和进入;内衣壳可分为两个同心的蛋白质层,包围着病毒核心复合物（RNA基因组和次要蛋白质VP1、VP4和VP6）。表层由VP7蛋白分子组成260个三聚体,这些三聚体以二十面体排列,内层由VP3蛋白五聚体组成。外衣壳蛋白VP2位于BTV粒子结构的最外层,可诱导机体产生抗体,决定BTV的血清型。早期诊断以及疫苗接种在控制疫病传播中具有重要意义,本研究中融合蛋白的表达及其单克隆抗体的研制为BTV1和BTV16的诊断以及新型疫苗的研究奠定基础。截取BTV1 VP2和BTV16 VP2中保守性较好、免疫原性较高的区域（氨基酸残基63～471）的基因序列,利用重叠延伸PCR（Gene splicing by overlap extension,SOE-PCR）将截取的BTV1 t VP2、BTV16 t VP2的基因序列进行融合,将融合基因克隆到p GEX-6p-1载体,构建截短融合VP2蛋白（tf VP2）的重组表达载体p GEX-6p-1-tf VP2。原核表达系统中表达tf VP2蛋白,并通过正交试验确定tf VP2蛋白在诱导剂（Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG）的浓度为0.2mmol/L,26℃诱导表达12 h时可溶性表达效果最佳。通过GST亲和层析纯化tf VP2蛋白,纯度为90%。通过间接酶联免疫吸附实验（Indirect enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA）比较使用tf VP2蛋白为免疫原进行免疫与使用BTV1 t VP2蛋白和BTV16t VP2蛋白为免疫原进行混合免疫的免疫效果,结果显示以tf VP2蛋白为免疫原免疫小鼠,小鼠血清效价可达1:2.048×10~5,高于混合免疫组（1:2.56×10~4～1:5.12×10~4）。通过细胞融合技术和有限稀释法共获得4株能稳定分泌抗tf VP2蛋白、BTV1t VP2蛋白和BTV16 t VP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G8、1G10、2C2和6E4。间接免疫荧光试验（Indirect immunofluorescence assay,IFA）结果表明1G8、1G10、2C2和6E4均能与真核表达的tf VP2蛋白、BTV1 t VP2蛋白和BTV16t VP2蛋白发生反应。通过斑点酶联免疫吸附试验（Dot enzyme-linked immunosorbent assay,Dot-ELISA）检测杂交瘤细胞株与灭活病毒的反应性,结果表明4株杂交瘤细胞株与BTV1灭活病毒和BTV16灭活病毒均能发生反应。选择3株效价较高的杂交瘤细胞株1G10、2C2和6E4,利用体内诱生法制备腹水,纯化后的单抗1G10、2C2、6E4的效价分别为1:5.12×10~5、1:2.56×10~5、1:5.12×10~5,亲和常数分别为8×10~9 L/mol、1.9×10~9 L/mol、8.6×10~9 L/mol。将BTV1 t VP2蛋白截短分段表达（N1～N4）,间接ELISA和Dot-ELISA实验表明单抗均可同时识别N3（243～382 aa）和N4（333～471 aa）。设计合成多肽L1、L2,通过Dot-ELISA和Peptide-ELISA检测单抗与多肽的反应性,结果表明4株单抗均可识别合成肽L1（326～360 aa）。对L1进一步截短（L1-1和L1-2）发现1G10、2C2和6E4可识别L1-2（338～360 aa）,即可识别BTV1 VP2蛋白的338～360 aa。本研究制备了抗BTV1 VP2蛋白和BTV16 VP2蛋白的单克隆抗体,并对其识别的表位区域进行鉴定,为蓝舌病新型疫苗的研究、检测方法的建立以及BTV1VP2蛋白抗原表位的筛选奠定了基础。