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云南省具有得天独厚的大型野生食用菌资源,本研究采集了云南省范围内31个地区及四川省理塘县、雅江县、康定县和乡城县的4532份野生食用菌标本。用ITS作为云南地区野生食用菌鉴定和分类的分子标记基因,大范围地调查了云南地区野生食用菌数目、食用菌种内和种间距离等,评估了ITS作为云南地区野生食用菌DNA条形码的可行性,为云南地区野生食用菌的保护和利用提供理论依据。此外,为探究了Trogia venenata(小白菌)导致的不明原因死亡(SUD)的致死因子,对Trogia venenata进行了钡含量的检测和群体遗传学分析。 目前取得了如下结果: 1、调查了4532份野生食用菌标本,涵盖了云南省12个州市31个县(乡)以及四川省与云南省邻近的理塘县、雅江县、康定县和乡城县4个县城,跨越了温带、亚热带及热带三种气候类型。根据标本的形态学特征和当地的俗名,初步估计标本里面包含了41个物种。 2、用ITS作为云南地区野生食用菌鉴定和分类的分予标记基因,大范围地调查云南地区野生食用菌数目,在4532余份标本里面挑选了2849份用CTAB法提取了基因组DNA,成功得到2256份可用的基因组DNA,PCR扩增得到ITS序列2207条,剪切校正后得到序列2020条(≥200bp),在NCBI里进行Blast后,序列覆盖率达到80%以上并可确定种名的有效序列为1790条。 3、根据GenBank Blast的最大相似度结果,我们将1790条ITS序列的比对结果分为≦95%-97%、≥90%-95%、<90%四个区间,以最大相似度≥97%为标准,物种数目为73个,而以≦95%-97%、≥90%-95%、<90%为标准,则分别增加10、27和12个新物种,总计122个物种,分予鉴定的物种数较之形态种数目大幅上升。 4、选择了Amanita、Boletus、Ramaria、Russula和Thelephora五个属的常见物种构建了NJ树,发现在鉴定的物种中存在着许多系统发育种(隐存种)。 5、分别计算了各个物种内、种间的遗传距离,结果显示K2P值在不同种属间有差异,大部分种间的K2P值都大于种内的。结合PCR扩增效率及测序片段出现杂合的频率,认为ITS作为云南地区大多数野生食用菌的DNA条形码基因是可行的。 6、探究了小白菌(Trogia venenata)导致的不明原因死亡(SUD)的致死因子,对云南省不明原因死亡高发地区的Trogia venenata样本进行了钡含量的检测和群体遗传学分析,钡含量检测结果证明钡含量不是导致不明原因死亡(SUD)的关键因子,群体遗传学分析结果表明不明原因死亡(SUD)与不同地区的Trogiavenenata种群的遗传变异没有直接联系。