【摘 要】
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目的利用生物信息学、免疫组化及体外细胞实验检测坍塌反应调节蛋白1（Collapse response mediator protein 1,CRMP1）在上皮性卵巢癌（Epithelial ovarian cancer,EOC）中的表达,探讨CRMP1在卵巢癌中的意义以及对卵巢癌恶性生物学行为的影响。方法1通过利用GEPIA、Kaplan-Meier Plotter和TIMER三种生物信息分析工具
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目的利用生物信息学、免疫组化及体外细胞实验检测坍塌反应调节蛋白1（Collapse response mediator protein 1,CRMP1）在上皮性卵巢癌（Epithelial ovarian cancer,EOC）中的表达,探讨CRMP1在卵巢癌中的意义以及对卵巢癌恶性生物学行为的影响。方法1通过利用GEPIA、Kaplan-Meier Plotter和TIMER三种生物信息分析工具分析CRMP1在卵巢癌中的表达水平及CRMP1与患者病理分期、临床预后及免疫细胞浸润之间的关系。2收集2016年1月至2021年1月于河北省人民医院经手术切除卵巢组织的患者病理切片,按照病理证实的卵巢组织良恶性将研究对象分为两个组:即上皮性卵巢癌组（25例）和正常卵巢组（25例）。在上皮性卵巢癌及正常卵巢的病理组织切片中,利用免疫组化（Immunohistochemistry,IHC）技术测量CRMP1、P53及P21的表达水平并进行统计分析。3体外成功培养卵巢癌OVCAR3细胞,通过质粒转染技术调控CRMP1蛋白表达量。根据处理方式的不同将OVCAR3细胞分为3组,其中转染CRMP1基因过表达质粒（pcDNA3.1（+）/CRMP1）的细胞作为实验组,转染空载体质粒（pcDNA3.1（+））的细胞作为阴性对照组,未进行转染的细胞作为空白对照组。进一步应用蛋白质印迹法（Western blotting,WB）测量CRMP1、P53及P21在三组细胞中的蛋白表达量,三组细胞的迁移能力则通过细胞划痕实验来验证。结果1 GEPIA结果表明,相比于正常卵巢组织中的表达量,CRMP1在卵巢癌组织中更低,不同病理分期的卵巢癌患者CRMP1表达水平无统计学差异（F value=1.05,P=0.351）。Kaplan-Meier Plotter结果表明CRMP1高表达的患者拥有更长的无复发生存期（Relapse-free survival,RFS）（HR=0.82,P=0.0049）及总生存期（Overall survival,OS）（HR=0.85,P=0.032）。TIMER结果表明CRMP1的表达与肿瘤纯度、CD4+T细胞之间无明显的相关性（P＞0.05）,但是与B细胞、CD8+T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞及树突状细胞之间呈负相关。2免疫组化结果表明,CRMP1及P53蛋白在卵巢癌组的阳性表达率显著高于正常卵巢组,但是P21蛋白在两组中均无明显表达。3在空白对照组及阴性对照组中,WB结果表明CRMP1蛋白表达量呈低水平,P53及P21蛋白表达量呈高水平。在转染CRMP1过表达质粒的实验组中,CRMP1蛋白表达量明显升高,同时P53蛋白表达量也较前增高（P＜0.05）,但P21蛋白表达量较前未见明显改变（P＞0.05）。4细胞划痕实验结果表明,细胞培养48小时后,空白对照组与阴性对照组之间的细胞迁移能力较强,且两组之间无明显差异（P＞0.05）,但实验组的细胞迁移能力显著降低（P＜0.05）。结论1在卵巢癌组织中,RNA水平的CRMP1表达量较正常卵巢组织低,CRMP1表达水平与病理分期无明显相关性,但是与患者的OS期及RFS期呈正相关,表明CRMP1在卵巢癌中起肿瘤抑制作用,在预测患者预后方面具有重要意义。此外,CRMP1与免疫细胞浸润有密切联系,提示CRMP1可能是潜在的免疫治疗靶点及预测免疫治疗效果的生物标志物。2蛋白水平的CRMP1在卵巢癌组织中的表达较正常卵巢组织高。CRMP1表达上调后可以抑制卵巢癌OVCAR3细胞的迁移能力,该过程涉及到P53蛋白的参与,预测CRMP1作为一种肿瘤抑制因子参与卵巢癌的发生发展过程。图5幅;表3个;参120篇。
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