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目的研究海兔素(Aplysin)在大鼠肝微粒体体外代谢中的酶动力学以及CYP3A的特异性抑制剂酮康唑对海兔素体外代谢的影响；观察海兔素对酒精性肝损伤大鼠肝组织Fas、FasL表达及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-a)水平的影响。方法1、15只雄性Wistar大鼠,颈椎脱臼处死,采用钙沉淀法制备大鼠肝微粒体,并通过BCA法测定大鼠肝微粒体的蛋白浓度。建立测定大鼠肝微粒体孵育液中海兔素含量的高效液相色谱法(HPLC),考察不同孵育时间(10、20、30、45、60、90min)、肝微粒体蛋白浓度(0.1,0.2,0.5,1.0,1.5,2.0mg/mL)、海兔素浓度(1,2,5,10,20,40,80mg/L)对代谢反应的影响,并采用双倒数作图法计算海兔素的酶促反应动力学参数(Km、Vmax、CLint);观察不同浓度酮康唑(0.5,2,5,10,20,40mg/L)对海兔素体外代谢的影响。2、50只雄性Wistar大鼠随机分为5组。正常对照组,每日灌胃生理盐水1次；酒精模型组,每日给予50%乙醇8mL/(kg·bw·d)灌胃,2周后把50%乙醇剂量递增为12mL/(kg·bw·d),继续灌胃4周；海兔素低、中、高剂量组,每日分别给予Aplysin50、100、150mg/(kg·bw·d)灌胃,酒精剂量同模型组。实验进行了6周。末次灌胃12h后,大鼠称重后给予7%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,留取肝组织,计算肝指数；HE染色观察肝脏组织的病理学改变；免疫组化法检测肝组织中Fas、FasL表达情况,计算其阳性表达率；并采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TNF-a的浓度。结果1、海兔素在0.5100mg/L范围内线性关系良好,日内、日间准确度在92.42%-100.58%,日内、日间精密度均小于3.18%,提取回收率在96.19%~97.83%,室温24h和-20-C冷冻一周稳定性良好,RSD均小于1.941%；海兔素在大鼠肝微粒体中代谢的最佳温孵时间为30min、最佳肝微粒体蛋白浓度为1mg/mL,并确定了酶动力学参数,米氏常数Km为19.72mg/L、最大反应速率Vmax为0.35mg/min/g Protein、固有清除率CLint为17.75mL/min/g Protein;CYP3A的特异性抑制剂酮康唑能够明显抑制海兔素的体外代谢,最大抑制率为68%。2、与正常对照组相比,酒精模型组大鼠肝指数明显增加(P<0.05)；与酒精模型组相比,海兔素中、高剂量组大鼠肝指数均显著降低(P<0.05)。HE染色病理观察结果显示,酒精模型组大鼠肝小叶结构模糊,胞质中可见大小不等、数量不一的圆形脂肪空泡,可见炎性细胞浸润；海兔素各剂量组肝小叶结构有不同程度破坏,与酒精模型组相比较,肝细胞坏死程度明显减轻。酒精模型组与正常对照组相比Fas/FasL表达明显增多,且血清TNF-a含量明显升高(P<0.05)；海兔素各剂量组Fas/FasL表达以及血清中TNF-a含量均低于酒精模型组,差异有显著性(P<0.05)；随着海兔素摄入剂量的增加Fas表达相应减少且成剂量依赖性(P<0.05)。结论本研究建立的高效液相色谱法快速、简单,且专属性和灵敏度高,适用于海兔素在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学研究,并推测CYP3A可能是参与海兔素体外代谢的CYP450亚型；海兔素可改善因酒精暴露引起的肝损伤,其机制可能与通过减少肝组织Fas、FasL表达、降低血清TNF-a水平从而抑制肝细胞的凋亡有关。